compoun 4880对apoe--小鼠主动脉斑块的影响及肥大细胞对平滑肌细胞迁移作用的研究.pdf

Compound 48/80 对ApoE-/-小鼠主动脉斑块的影响 及肥大细胞对平滑肌细胞迁移作用的研究 研究生： 孙 玉 慧 导 师： 杨永宗教授 中 文 摘 要 目的 肥大细胞 （m ast cell s ，MCs ）是一种参与炎症及免疫应答反应的 细胞。近年来随着对动脉粥样硬化 （atherosclerosis ，AS ）认识的不 断深入，发现 MCs 与 AS 发生发展的各个阶段都密切相关。AS 斑块 的细胞成分包括一些炎症细胞（T 淋巴细胞，巨噬细胞，MCs 等）和 从血管中膜迁移到内膜的平滑肌细胞，但是关于 MCs 与平滑肌细胞 的关系并不明确，本实验以ApoE -/ - 小鼠为研究对象，复制 AS 模型， 以 Compound 48/80 和富马酸酮替芬作为处理因素，研究 Compound 48/80 和富马酸酮替芬对 ApoE -/ - 小鼠 AS 斑块的影响；同时以大鼠主 动脉血管平滑肌细胞（v as cular smooth muscle cells ，VS MCs ）为研究 对象, 以MCs 作为处理因素，研究 MCs 对 VS MCs 迁移的作用，并初 步探讨其作用机制。 方法 30 只 8 周龄雄性 ApoE -/ - 小鼠随机分为 3 组：对照组，Compound 48/80 组和富马酸酮替芬组。对照组给予普通饲料饲养 24 周； Compound 48/80 组给予 0.15mg/kg Compound 48/80 , 每周两次腹腔注 射，普通饲料饲养 24 周；富马酸酮替芬组：0.1ml/ 只，每天灌胃一次， 1 普通饲料饲养 24 周。实验结束后处死动物，摘眼球取血，分离血清， 采用酶法测定血清脂质含量，苏丹Ⅳ大体染色，小鼠原位灌流固定， 取胸主动脉置 10 ％中性缓冲福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，连续 切片，HE 染色；采用改良贴块法培养大鼠 VS MCs ，α-smooth muscle actin 鉴定大鼠VS MCs ，Compound 48/80 处理大鼠腹腔 MCs 后，采用荧光 分光光度仪检测组胺释放率，甲苯胺蓝染色观察 MCs 脱颗粒情况， 用 DMEM、DMEM ＋Compound 48/80、MCs、MCs ＋Compound 48/80、Compound 48/80 刺激的MCs 颗粒释放液、Compound 48/80 刺激的MCs 残余物、无Compound 48/80 刺激的MCs 颗粒释放液和无Compound 48/80 刺激的MCs 残余物与同步化 的VSMCs 相互作用，Transwell 渗透支持系统观察MCs 对VSMCs 迁移的影响， FITC 标记的鬼笔环肽观察VSMCs 微丝结构的改变。 结果 1．Compound 48/80 组，富马酸酮替芬组和对照组之间的各项血 脂含量无明显差异 （P0.05 ）；苏丹Ⅳ大体染色结果显示：三组胸腹主 动脉均有斑块形成，但 Compound 48/80 组 AS 病变最为严重；HE 染 色结果显示：对照组，富马酸酮替芬组和Compound 48/80 组胸主动脉斑块面 积和最大狭窄程度分别为 0.51±0. 16mm2 、0.72±0.15 mm2 、1.06±0.18mm2 和 14±4 ％、24±7 ％，34±10％；富马酸酮替芬组和Compound 48/80 组的胸主动脉斑 块面积和最大狭窄程度与对照组相比，P0.05 ；Compound 48/80 组的胸主动脉斑 块面积和最大狭窄程度与富马酸酮替芬组相比，P0.05 。 2 ．Transwell 渗透支持系统观察 MCs 对 VS MCs 迁移的影响，结 果显示： (1) MCs 促进 VS MCs 发生迁移：MCs 组，无Compou