大鼠弥漫性轴索伤模型中gpr17的表达变化及意义.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………1 英文摘要……．．………………………………………．4 研究论文大鼠弥漫性轴索损伤模型中GPRl7的表达变化及意义 前言………………………………………………8日U舌………………………………………………石 材料与方法………………………，………………．．9 结果…．…………………………………………．16 附图……………………………………………．．19 附表……………………………………………．．30 讨论……………………………………………．．31 结论……………………………………………．．35 参考文献…………………………………………．35 综述GPRl7在中枢神经系统中的作用研究进展………………．40 致谢…………………………………………………52 个人简历……………………………………………．．53 中文摘要 大鼠弥漫性轴索损伤模型中GPRl7的表达变化及意义 摘 要 axonal 目的：弥漫性轴索损伤 diffuse 导致的以脑白质轴索的弥漫性受损为特征的一种脑损伤。其损伤机制多认 为是由于受伤时头颅在加减速作用下使脑内的各组织之间出现剪切力而 造成的。DAI主要累及脑的中轴和附近结构，包括大脑半球、小脑、胼胝 体以及脑干等部位，其病理学改变主要是脑白质广泛的变性和损伤，轴索 肿胀和轴索收缩球的出现是其光镜下的表现特点。临床主要表现为意识障 碍，治疗效果及预后情况较差。对于DAI的治疗和提高患者的预后质量， 是神经学科的一项难点和重点。 置的孤儿G蛋白偶联受体。它可以特定被尿嘧啶核苷酸 UDP、UDP．葡 家族双重激活。GPRl7主要分布在脑、肾脏、心脏等器官，在脑内，GPRl7 主要分布在白质、灰质、室管膜下区、海马齿状回及胼胝体等部位。已有 研究结果表明，GPRl7在脊髓损伤、髓鞘损伤或变性、脑缺血性损伤以 及调节少突胶质细胞和神经元分化等方面都发挥着重要的作用。在弥漫性 轴索损伤中，不同时间发生着不同程度的病理和微环境的变化，而这些变 化与GPRl7的作用可能存在交集。 本实验通过液压冲击的方法建立大鼠的弥漫性轴索损伤模型，观察大 鼠大脑损伤后不同时间的神经元和轴索髓鞘的病理变化，以及GPRl7在这 些时间中的表达变化。以探究GPRl7的表达与弥漫性轴索损伤后的进展和 修复程度之间可能存在的关系和意义，从而对这一疾病的诊断和治疗有更 进一步的认识。 方法：健康成年S—D大鼠，体重250．3009，随机分为空白对照组、假 共六个时相组，每组5只大鼠，进行实验及观察。 所有损伤组的大鼠均用液压冲击装置冲击颅骨冠状缝和顶枕缝之间， 矢状线正上方部位的硬膜的方法来制作弥漫性轴索损伤的模型。冲击压力 中文摘要 为中度1．6alto。空白对照组不给于任何处理。假手术组切开头皮，磨开骨 窗后，不予以液压冲击。损伤组给予液压冲击处理后，记录损伤时间备用。 进行特殊染色和免疫荧光组织化学染色的各组大鼠，均给予全身灌注 固定后取脑。然后置于4％中性甲醛固定液中，4。C冰箱冷藏存放备用。进 行实时荧光定量PCR相对定量检测的各组大鼠，在到达规定时间点后， 给予深度麻醉后直接断头取脑，去掉硬膜和小脑，置于冻存管中液氮速冻 保存备用。 理变化。用免疫荧光组织化学染色和实时荧光定量PCR相对定量检测分 别检测GPRl7的蛋白和mRNA在不同时间的表达情况。实验数据以均数 分析，采用非参数检验Kruskal。Wallis H检验法，以P 0．05为有显著性 差异。 结果： 1 空白对照组HE染色中神经细胞形状正常规则，结构完整清晰。 镜下观察普遍均匀而致密，也没有异常细胞类型的出现和增生。尼氏染色 中可见神经细胞的形态结构正常，细胞质内有蓝紫色的小颗粒状，均匀致 密的尼氏小体。Gless嗜银染色可见在胼胝体中和其附近的轴索排列较整 齐。假手术组出现了少许的神经元水肿，空泡变性和少量的小胶质细胞浸 润，而轴索排列也有少许的紊乱。损伤后急性期的1h和3h组的HE染色 中神经元水肿和空泡变性现象增多，小胶质细胞数量也明显增多，出现神 经细胞卫星现象。而且尼氏小体也逐渐的崩解减少，轴索断裂紊乱现象也 增多，出现了轴索肿胀和轴索收缩球。12h和24h组上述损伤进一步加重， 出现大量的神经元变性坏死，小胶质细胞数量大幅增多。尼氏小体的数量 大幅减少甚至消失。轴索的断裂和紊乱也更加的严重。72h和7d组虽然 仍然有损伤性的现象，但已经开始出现不同程度的恢复期改变。HE染色 中细胞结构和形态逐步恢复，神经元的变性、水肿和坏死现象逐渐减少， 小胶质细胞的数量也呈下降趋势。尼氏小体数目逐渐的增多，轴索的排列 和结构逐渐变得整齐和正常。 2免