中国日本血吸虫粒体dna的遗传变异研究.pdf

华 中科 技 大 学 同济 医学晚 不直d匕x开究 生 月LA匕全仑文 中国日本血吸虫线粒体DNA的遗传变异研究 研究生:郭凯文 导 师:牛安欧 华中科技大学同济医学院病原生物学系 中 文 摘 要 (Fi本血吸虫病是一”严重”害人”健康、影响经济”设和社“”展 的人兽共患寄生虫病。在我国，日本血吸虫流行地区分布在长江流域及 其以南的12省、市、自治区。由于各地区存在较大的生态环境差异和 自然环境的长期阻隔等因素，在长期进化过程中，我国日本血吸虫存在 不同程度的遗传分化。揭示自然隔离群之间日本血吸虫的遗传变异，对 血吸虫致病力、临床表现、对药物的反应和治疗效果的差异，传播动力 学、寄生虫与宿主的相容性等方面的研究有极大的帮助，并为指导抗血 吸虫药物的选择、血吸虫病的诊断、疫苗的研制以及进一步完善血吸虫 控制策略等提供科学的理论依据介研究采用聚合酶链反应一单链DNA 构象多态性((PCR-SSCP)分析方法对我国不同自然隔离区日本血吸虫的 线粒体DNA中细胞色素C氧化酶亚基I(COI)和NADH脱氢酶亚基 I(NDI)基因片段进行研究，并运用生物信息学方法对其序列进行分析、 整理，得出序列系统进化树，从而获得中国日本血吸虫线粒体DNA的 多态性差异资料。 方法 集中国台湾、云南洱源、四川天全、安徽贵池、湖南岳阳、江西 新建以及湖北武汉、湖北钟祥、湖北阳新、湖北监利、湖北松滋共七省 华 中科 技 大 学 同济 医学院 不页士 减开兜 生 月卜A 论 文 十一地日本血吸虫标本。首先常规抽提基因组总DNA (其中包括线粒 体DNA)，接着以特异性引物对其线粒体DNA进行PCR扩增，再用 PCR产物进行 SSCP分析，其结果可直接用于血吸虫各地域株线粒体 DNA遗传变异的分析。为了验证PCR-SSCP的结果及进一步分析日本 血吸虫线粒体DNA的遗传变异、初步探讨线粒体DNA进化过程，本 研究将PCR扩增产物分别测序，以生物信息学方法对所测序列加以比 较，构建序列进化树。 结果: (I)PCR结果: ① ND工:PCR产物经琼脂糖电泳后，在紫外线照射下可见所有样本 均显示一个条带，位于400-500bp之间，片段无大小差异; ② COI:PCR产物经琼脂糖电泳后，在紫外线照射下可见所有样本 均显示一个条带，位于400-500bp之间，片段无大小差异。 (2)SSCP结果: ① ND工:湖北省武汉、钟祥、阳新、松滋四地之间无差异，具相同 条带;监利株具三个条带;中国台湾两个条带;湖南五个条带;安徽三 个条带;四川、云南有相近带型，在NDI片段中有三个条带;江西株有 四个条带。 ② CO工:湖北境内五个地域株中武汉株与监利株存在三个条带;中 国台湾株日本血吸虫有两个条带;湖南、安徽均有五个条带;四川、云 南株分别存在三和四个条带;江西地域株有四个条带。 (3)序列分析结果: ①中国日本血吸虫各地域株遗传距离为0.000-0.5003，明显小于与 曼氏血吸虫之间的遗传距离。 ②中国大陆株与中国台湾株 日本血吸虫之间遗传距离为 华 中科 技 大 学 同 济 医学 院 s谊dL-s,开_IF_生 月r-Y匕论 文 。.1710-0.5003，存在较大差异，在树状图中可归为两类; ③中国大陆山区型日本血吸虫，即云南洱源和四川天全之间遗传距离 为0.0000，在树状图中归为一类; ④中国大陆湖沼洲滩型日本血吸虫株，即湖南岳阳、江西新建和安徽 贵池三个地域株之间遗传距离为 0.0451-0.1481，在树状图中处于并列 位置; ⑤湖北省境内不同地域株之间遗传距离为0.000-0.0112，在树状图 中归为一类; ⑥氨基酸模拟翻译结果:各地域株之间氨基酸变异比例为0.85%，小 于DNA序列变异程度(3.43%).) 结论: 本课题采用PCR-SSCP一序列测定研究方法对中国各地域株日本血吸 虫的遗传变异和进化情况进行研究。结果显示我国各地日本血吸虫存在