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应用特异性噬菌人抗体克隆和筛选新的大肠癌抗原基因
摘要
目的：快速构建人大肠癌细胞HRT一18eDNA表达文库，用抗人大
肠癌噬菌体抗体CH209筛选新的大肠癌抗原基因。
方法：从人大肠癌细胞HRT一18中抽提总RNA后磁珠法分离mRNA，
以纯化的mRNA为模板，以含sfi
7
5 of
Mechanismat endRNA
cDNA的第一链，利用SMART(Switching
化，sfiI酶切后经Chroma
spin-400柱分级分离，插入片段与九
滴度，进行蓝白筛选以确定文库重组率，并随机挑选克隆经PCR扩增
鉴定插入片段的大小。最后将文库进行扩增并鉴定库容量。用抗大肠
检测鉴定后进行序列分析。
隆经PCR法鉴定插入片段的大小，插入片段介于O．5—2．0kb之间，平
均长度为1．1kb。文库经三轮筛选后共获得10个阳性克隆，经PCR
扩增后进行测序分析及相关数据库比对，分别代表了10个cDNA插入
片段(抗原基因)。其中5个基因与已知基因高度同源，3个基因与
GenBank中已知基因部分同源，2个可能是新基因。
结论：本实验成功构建了人大肠癌细胞的cDNA文库，文库质量
较高，有利于以cDNA文库为基础的进一步的实验研究。用抗大肠癌
噬菌体人抗体CH209筛选文库，共得到10个大肠癌相关抗原基因，
其中有2个可能是新基因，它们与大肠癌的相关性有待于进一步的研
究证实。
关键词：大肠癌，cDNA文库，抗原，噬菌体人抗体，基因克隆
II
ABSTRACT
cDNA constructed
Objective：Thelibrary was
expression，which
with
human
colorectalcancercell
HRT-1 screenedwiththe
8，was phage
findnovel
CH209inorderto colorectal
antibody carcinoma
antigen
genes．
Methods：ThetotalRNAwasextractedfromhumanCRC
8andthe the
m鼬町Awasisolated疗om
(colorectalcancer)cell职T-1
totalRNA thenthefirst—standcDNA
bv
MagneSpheretechnique。and
sfisitewhilethe
was with I
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