第五、六章分子生物学研究法摘要.ppt

　 5.2.1 核酸的凝胶电泳 (Agarose Polyacrylamide) 　 琼脂糖凝胶电泳 在琼脂糖凝胶电泳中，一般加入溴化乙锭（EB）--ethidium bromide染色，此时，核酸分子在紫外光下发出荧光，肉眼能看到约50ng DNA所形成的条带。 　 4. 焦磷酸测序法 (Pyrosequencing ) 适用于已知序列的DNA片段进行验证分析； 四种酶：DNA聚合酶、硫酸化酶、荧光素酶和双磷酸酶； 三种原始底物：四种dNTP（dATPS，dTTP，dCTP，dGTP）之一、APS、荧光素。 dATP也是荧光素酶的底物，所以用dATPs代替，后者只是DNA聚合酶的底物。 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH) 首先对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记（如生物素），然后用原位杂交法与靶染色体或DNA上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体来确定该DNA序列在染色体上的位置。 6.1.4 基因定点突变(site-directed mutagenesis) 通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列，用于研究某个（些）氨基酸残基对蛋白质的结构、催化活性以及结合配体能力的影响，也可用于改造DN