microrn-122及其靶基因cpeb1在角膜移植排斥中的作用研究.pdfVIP

摘要 目的：研究microRNA-122及其靶基因CPEB1在角膜移植排斥中的作用。 方法：1.建立小鼠穿透性角膜移植术（penetrating keratoplasty，PKP）模 型；2.利用Real-time PCR分析 miR-122、CPEB1的表达；3.过表达 agomir/antagomir-122分析CPEB1的表达及细胞凋亡；4.体外培养角膜基质细 胞系，利用miR-122结合位点野生型或突变型的CPEB1的慢病毒感染角膜基质 细胞，后用促炎细胞因子（cytokine，TNFα/IL-1β/TNFγ）刺激并检测角膜 基质细胞的凋亡和NO产生。 结果：1.穿透性角膜移植术后流式检测： 角膜移植术后未排斥组中免疫细胞较 对照组的明显增加（P0.05），而排斥组与对照组之间无明显差别(P0.05)。 2.Real-time PCR：miR-122及CPEB1在角膜基质层中的表达最高，与角膜上皮 层、内皮层差异有统计学意义（P0.0001）；而在免疫细胞（DC、BMM、T cell、B cell）中均未检测到miR-122的表达，其靶基因CPEB1的表达量也较 低。3.基质细胞感染：利用miR-122结合位点野生型或突变型的CPEB1的慢病 毒感染角膜基质细胞,48hr后感染率均达90%以上；4.过表达 agomir/antagomir-122检测：转染agomir-122的基质细胞中，CPEB1的表达低 于对照组，角膜基质细胞凋亡降低，差异有统计学意义（P0.05）,转染 antagomir-122组中CPEB1的表达高于对照组，角膜基质细胞凋亡增加，差异 有统计学意义（P0.05）；5.细胞凋亡及NO检测: 过表达CPEB1促进角膜基质 细胞凋亡和NO产生，差异有统计学意义（P0.05）；不论是CPEB1-WT或是 CPEB1-Mutated基质细胞，应用细胞因子处理48hr凋亡明显增高，差异有统计 学意义（P0.05）；细胞因子处理组中，CPEB1-WT组中基质细胞较CPEB1-MT 组中凋亡明显下降，差异有统计学意义（P0.05），而未处理组中，CPEB1-WT 与CPEB1-MT无明显差异（P0.05）；不论有无细胞因子刺激， CPEB1-Mutated 基质细胞组中，NO的产生均高于CPEB1-WT组，差异有统计学意义(P0.05）。 结论：MicroRNA-122及其靶基因CPEB1在角膜基质细胞高表达，而microRNA- 122在免疫细胞中不表达； 当microRNA-122表达下调时(角膜移植排斥组)， CPEB1表达呈上升趋势，导致角膜基质细胞凋亡及NO产生增加，从而促进角膜 移植术后免疫排斥反应。 硕士研究生 李凤洁（眼科学） 指导教师 史伟云 教授 关键词：microRNA-122；胞质多聚腺苷酸化结合蛋白 1；细胞凋 亡；移植免疫排斥；角膜基质细胞 万方数据 The Role of MicroRNA-122 and Its Target Gene CPEB1 In Corneal Allograft Rejection Abstract Purposes ：To investigate the role of microRNA-122