hgf基因修饰骨髓间充质干细胞移植在输尿管梗阻大鼠肾脏中的分布.pdf

·中文论著摘要· HGF基因修饰的骨髓间充质干细胞移植在输尿管梗阻 大鼠肾脏中的分布 目 的 梗阻性肾病(obstructive 间质纤维化为主要病理特点。儿童梗阻性肾病最终可导致终末期肾脏疾病 renal diseaseESRD)，梗阻性肾病占所有ESRD的0．3％，占所有儿童 (end—stage 肾移植的16．1％。 骨髓间充质干细胞(MSCs)具有自我增殖和多向分化潜能的特点，可向中胚 层、内胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化，包括成骨细胞、心肌细胞、神经 细胞和肾脏细胞等，有研究表明骨髓MSCs在急性肾脏损伤小鼠模型中可以促进 肾脏结构修复、改善肾功能。肝细胞生长因子(HGF)是促进成体干细胞向肾脏 细胞分化的候选因子，还具有阻止肾小管细胞发生凋亡的能力。 本实验通过体外分离、培养、纯化和扩增大鼠骨髓MSCs，用带有肝细胞生 长因子基因的腺病毒(Ad．HGF)进行转染，并建立单侧输尿管梗阻(UUO)大 鼠动物模型，将转染Ad．HGF的MSCs移植入UUO大鼠体内，观察其是否能够 迁移、分布、定居到肾脏，为梗阻性肾病的基因治疗及细胞替代治疗提供一定的 理论基础。 材料与方法 定；以不同强度携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad．GFP)转染MSCs，用流式 细胞仪测定转染效率，筛选出最佳转染强度(MOI)，并以最佳转染强度将HGF 基因体外转染MSCs；用ELISA法检测转染后MSCs的HGF表达水平。 选择雌性2月龄SD大鼠16只，制作UUO大鼠动物模型，随机分为移植组 和对照组，再以UUO术后7、14天各分为2组，每组各4只。于UUO术后6小 时内将转染Ad．HGF的MSCs经鼠尾静脉注射到移植组大鼠体内，对照组注射等 量生理盐水，于UUO术后7、14天分别处死移植组及对照组大鼠，取双侧肾脏， 大鼠肾脏中的分布情况。 结 果 1、骨髓MSCs原代培养7-9天可传代，传代后细胞增殖加快，4．5天可再次 传代；流式细胞仪鉴定结果显示骨髓MSCs中CD90阳性细胞占99％，不表达 CD34。 2、转染强度MOI=400时，转染效率可达73．29％。 3、Ad．HGF转染MSCs48小时，细胞培养上清HGF表达含量达到最高峰。 4、Y染色体原位杂交结果表明：在UUO大鼠术后7、14天梗阻侧肾脏均可 见Sry阳性细胞，而梗阻对侧肾脏及对照组双侧肾脏均未见Sry阳性细胞。 当日结 哦1；It, 1、贴壁细胞分离法可以分离、纯化大鼠MSCs。 2、MSCs可作为基因载体细胞，用于HGF的基因治疗。 位到梗阻侧肾脏。 关键词 骨髓问允质干细胞；肝细胞生长因子；基因转染；单侧输尿管梗阻；肾脏 2 ·英文论著摘要· Distributionof stemcellstransfected mesenchymal with factorintherat’S with hepatocytegrowth kidney unilateralureteralobstruction Objective Obstructive acommondisorderin nephropathy(O№is urinarysurgery,which featureis renalinterstitialfibrosis．In majorpathologic isthe causeforend renal nephropathyprimar