人卵巢癌类干细化疗耐药及逆转的实验研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 卵巢癌类干细胞的化疗耐药及逆转的实验研究 刖 吾 stem 肿瘤干细胞(tumorcell)是存在于肿瘤细胞群体中的少数干细胞样癌细胞 亚群，与肿瘤进展和转移的发生密切相关。它具有干细胞的特性，能够自我更新并 通过种植到生物体内形成与原发灶相似的肿瘤细胞。由于肿瘤干细胞具有天然耐药 性，能将药物泵出细胞膜外，因此人们已经怀疑肿瘤干细胞是否就是传统肿瘤化疗 方法对于肿瘤的治疗效果有限的根源。 现在应用于临床上的抗卵巢癌药物繁多，但无论是联合用药还是单独用药，这 些药物的作用对于临床病人的治疗效果都很有限。常用的传统药物有：阿霉素，顺 铂，环磷酰胺等，它们都是细胞周期非特异性药物，对肿瘤细胞的DNA具有毒性。 这些药物对肿瘤干细胞的杀伤作用有限。因为在肿瘤于细胞膜上存在一种膜转运子 ABCG2，它是一种ATP依赖的结合转运体家族，能够将药物泵出细胞外，使细胞具 有天然的多重耐药性。同时有实验表明脑胶质瘤细胞中的CD133+亚群对阿霉 素具有抵抗作用，因此我们选用阿霉素和卵巢癌治疗的常用药顺铂作为传统抗肿瘤 药物的代表来进行卵巢癌类干细胞对传统药物的药敏实验。钙通道蛋白阻滞剂维拉 帕米是ABC家族的抑制剂，能够逆转表达ABCG2膜蛋白的多重耐药，使肿瘤干细 胞迅速死亡。因此我们同时尝试用维拉帕米来阻断ABCG2蛋白，观察其是否对传 统药物耐药存在逆转作用以初步分析肿瘤耐药的相关因素。 材料与方法 一、材料 1、卵巢癌细胞株 OVCAR3细胞系由中国医科大学附属盛京医院妇产科副教授周欣提供。为 实验对照组。 卵巢癌类干细胞：OVCAR3细胞系进行无血清培养，第五代所形成的细胞团 中卵巢癌类干细胞大约可占10％。取五代之后的细胞用于实验。为实验组。 2、细胞培养 培养液中取出，种于铺有琼脂的6厘米培养皿中，加入无血清的DMEM／F12培养 液，隔天半量换液，4．5天形成细胞团，传数代后形成富集卵巢癌类干细胞的细胞 团。 类干细胞的抑制作用及维拉帕米对其的影响 每孔只]JH200I．tL培养液。重复实验三次，测定每次的相对抑制率。 4、用软琼脂克隆实验检测OVCAR3细胞和卵巢癌类干细胞对阿 霉素及顺铂的抑制率及维拉帕米对其的影响。 方法如下：下层O．6％浓度的琼脂中不含有细胞，上层0．3％浓度的琼脂中含有 OVCAR3细胞或卵巢癌类干细胞。表面覆盖条件液(条件液中含有化疗药物)。3 周后观察形成的克隆数。重复上述实验三次，收集数据，进行统计学分析。 实验结果 1、培养出的卵巢癌细胞形态学观察具有干细胞的生长特点，前期 实验中己验证其具有干细胞特点。卵巢癌类干细胞悬浮生长，形成干 细胞样细胞团。 2、MTT检测结果． 卵巢癌类干细胞与OVCAR3细胞相比，对阿霉素和顺铂有耐药性(Po．05)， 维拉帕米能够在一定程度上逆转卵巢癌类干细胞的耐药性(PO．05)。 3、软琼脂克隆实验结果 卵巢癌类干细胞与OVCAR3细胞相比，对阿霉素和顺铂有耐药性，维拉帕米 能够在一定程度上逆转卵巢癌类干细胞对阿霉素的耐药性，而在此实验中对于逆 转顺铂的耐药性作用不明显。 2 结论 卵巢癌类干细胞对阿霉素和顺铂这两种治疗常用药有耐药作用，维拉帕米能够 在一定程度上逆转卵巢癌类干细胞对阿霉素的耐药作用，MTT实验中维拉帕米能 够在一定程度上逆转卵巢癌类干细胞对顺铂的耐药性，而在软琼脂克隆实验中这 种逆转作用则不明显。 关键词 卵巢癌干细胞，耐药性，ABCG2 ● 英文论著摘要 ● onthe resistanceandreversionin Study drug 0Varlancancerstem．．1ike cells ectiv