第九章新品种培育精要.ppt

第九章 新品种培育 一、原生质体变异 二、组织培养与诱变育种 三、体细胞杂交 四、多倍体与单倍体 五、雌核发育 六、植物离体受精 七、胚胎嵌合 一、原生质体变异 变异表现：染色体数目和结构、基因突变、性状改变（生长习性、抗病性、发育特性等） 原生质体再生植株遗传变异的原因： 一是材料本身；二是分离和培养过程中 意义： 1、容易短时间内得到大量变异群体 2、方便进行遗传操作 二、组织培养与诱变育种 诱变育种：利用各种物理因素、化学因素和生物因素诱导植物发生突变,根据育种目标选择新品种的育种技术。 植物组织培养与诱变育种相结合的优点 1.诱变诱导产生自然界不存在或极为罕见的新性状、新类型; 2. ①植物组织培养材料如茎尖培养、花药(含小孢子)培养、悬浮细胞或原生质体培养等培养材料微小,诱变剂容易吸收,易获得数量较大而且均匀一致或基本一致的诱变群体。 3.增加再生植株的变异频率,获得更多的变异材料。 4.植物组织培养技术可对突变材料在短期内进行扩大繁殖,产生数量较多的突变群体。 植物组织培养与诱变育种相结合的关键问题： 第一,确定适合的诱变剂； 第二,确定适合的诱变材料(或靶细胞或靶组织)。选择诱变 的植物组织培养材料要考虑其分散程度和整齐度,以 及再生能力和再生途径,还要考虑能否获得足够大的 诱变群体； 第三,需考虑到诱变剂的有效性和培养材料对诱变剂的敏感 程度和特异性； 第四,应结合植物组织培养环境条件 ,设计有效体外选择方 案,提高突变体选择效率。 常用人工诱变剂 物理诱变剂：如X射线、γ射线、快中子、慢中子、紫外线和β射线 ,以及激光和各种粒子的微束等； 化学诱变剂： 烷化剂：主要有甲基磺酸乙酯(EMS) 、亚硝基乙基脲(NEH) 、乙烯亚胺(EI) 、硫酸二乙酯(DES) 、N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG或 NG)和亚硝基乙基尿烷(NEU)等； 碱基类似物：5-溴尿嘧啶(BU) 、5-溴脱氧尿核甙(BudR) 、2-氨基嘌呤(AP)等 其他：叠氮化钠(NaN3) 、抗生素、芥子气、吖啶、羟胺及诱发加倍的试剂如秋水仙素等）。 三、体细胞杂交 1、杂交的不亲和性 植物体细胞杂交大体上包括以下几个环节：原生质体的分离和培养，原生质体间的融合，融合后杂种细胞的选择，诱导杂种细胞产生愈伤组织和再生植株。 2、体细胞杂交植物常用鉴定方法 RFLP标记是发展最早的DNA标记技术。RFLP是指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起的。 RFLP技术主要包括以下基本步骤： DNA提取→酶切DNA→电泳分开DNA片段→DNA片段转移到滤膜上→利用放射性标记的探针杂交显示特定DNA片段和结果分析。 RFLP作为第一代分子生物学标记自问世以来已广泛运用于多门生物学科研究中，但它运用于植物抗性研究还只是近几年的事。RFLP能对植物的抗性基因进行定位和分离，利用RFLP技术，对于核基因组或叶绿体基因组，尤其是后者，若能提取纯净DNA，则可直接从酶切后的电泳图谱看出其多态性，利用这一方法可以测定种群内、种群间不同水平的物种在污染环境下抗性分化进化水平上的差异。 与核酸序列分析相比，RFLP可省去序列分析中许多非常繁琐工序，但相对RAPD 而言，RFLP方法更费时、费力，需要进行DNA多种酶切、转膜以及探针的制备等多个步骤，仅对基因组单拷贝序列进行鉴定。但RFLP又有比RAPD优越之处，它可以用来测定多态性是由父本还是母本产生的，也可用来测定由多态性产生的突变类型究竟是由碱基突变或倒位、 还是由缺失、插入造成的。 RFLP的类型 1.点的多态性 表现为DNA链中发生单个碱基的突变，且突变导致一个原有酶切位点的丢失或形成一个新的酶切位点。Southern杂交即可诊断。 2.序列多态性 因DNA链内发生较大部分的缺失 重复 插入等变异，其结果是即使其内切酶位点碱基序列没有变化，但原有的内切酶位点相对位置发生变化从而导致RFLP。 四、多倍体和单倍体 1.染色体工程：多倍体育种和单倍体育种 1.特纳氏综合症（Turner）是常见的女性性染色体异常疾病。常见的核型是45,X,少数是嵌合体,出生率1/2500～1/5000。身材矮小，原发性闭经，性幼稚，蹼颈，后发际低，宽乳距,肘外翻是本病的主要临床特征。 2.克氏综合征（Klinefelter Syndrome） 是常见的男性性染色体异常疾病，典型的核型为47，XXY。表型特征有睾丸发育不全。身材修长，乃足跟至趾骨间的距离增长所致。男子乳腺发育、阴毛呈女性型分布，阴茎及睾丸均小。严重者伴有智力迟钝、隐睾及尿道下裂等。本病