七氟醚对树突状胞成熟过程及成熟树突状细胞活力的影响.pdf

P 、T ^ ～0b▲▲、 0躲黔 目 录 中文摘要……………………………………………………………………．．1 英文摘要………………………………………………………………………3 研究论文七氟醚对树突状细胞成熟过程及成熟树突状细胞活力的影响 前言………………………………………………………………………66日U舌…………．……………………．………………………………．…… 材料与方法………………………………………………………………6 结果……………………………………………………………………。lO 附图……………………………………………………………………。12 附表……………………………………………………………………．．19 讨论…………………………………………………………．．…………20 参考文献………………………………………………………………。24 综述七氟醚的理化性质及临床研究进展………………………………。26 致谢…………………………………………………………………………．．37 个人简历………………………………………………………¨…………。38 中文摘要 七氟醚对树突状细胞成熟过程及成熟树突状细胞活力的影响 摘 要 稳定，诱导迅速，对气道刺激性小，对循环系统抑制轻，苏醒快而完全， 且无组织毒性，是临床上应用较广泛的的吸入性麻醉药。树突状细胞 (dendritic 也是唯一能够在体内外激活初始T淋巴细胞的APC，在启动细胞免疫应答 中发挥重要作用，但是骨髓中新生成的DCs前体一般需要经过三个阶段即 未成熟阶段、迁移阶段、成熟阶段才能提呈抗原并启动免疫应答，而从免 疫表型上则分为未成熟树突状细胞和成熟树突状细胞。本实验通过七氟醚 作用于两种表型的树突状细胞即未成熟树突状细胞(imDCs)和成熟树突 状细胞(mDCs)，来探讨七氟醚对树突状细胞成熟过程及成熟树突状细胞 活力的影响。 方法：无菌条件下采集健康孕妇正常胎儿脐带血70ml左右，用肝素 抗凝。在超净工作台上用生理盐水：脐带血为1：1的比例稀释后，再按照 稀释血：淋巴细胞分离液之比为2：1的比例缓缓加到淋巴细胞分离液上 层，密度梯度离心法获得脐血单个核细胞(CBMC)，将细胞用生理盐水清 洗3次后弃上清，加入无血清培养基重悬并计数单个核细胞，调整细胞密 养箱中孵育2h，移去悬浮细胞，无血清培养基轻轻洗涤两次，以去除残 留非贴壁细胞，保留贴壁细胞即为单核细胞，调整细胞数量为1×100／ m1。加入细胞生长因子：即重组人类粒细胞集落刺激因子(rhGM 常规培养组作为对照组(C组)、未成熟表型组(I组)、成熟表型组(M 天用2．5％七氟醚(为混合气体体积分数)，处理2h，其余同C组。M组： 培养至第13天用2．5％七氟醚(为混合气体体积分数)，处理2h，其余同 C组。培养过程中每天在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态学变化。 培养到第14d时收集细胞以流式细胞分析仪分析各组细胞免疫表型抗原 中文摘要 CD80、CD86、 子之一)的表达率，收集培养到第14d的各组细胞培养上清液用双抗体夹 为反应细胞，培养到第14d的各组DCs作为刺激细胞，用四甲基偶氮唑 蓝(MTT)法检测DCs刺激混合淋巴细胞的增殖活力。 结果： 1七氟醚对各组DCs形态的影响：倒置显微镜观察，七氟醚未处理之 前，第2天，细胞大小均一，表面光滑，各组细胞均于第3-4天开始出现 集落，细胞体积逐渐变大。见Fig．1～2。第5-6天细胞表面不规则，有 短毛刺样突起；七氟醚处理后第14天观察，与C组相比，I组细胞毛刺