体外联合化疗对epg2人肝癌细胞株cd90cd44表达的影响及意义研究.pdf

影响及意义研究 硕士生姓名： 刘翠萍 指导教师： 吕 田教授 指导小组： 张华博士 专业名称： 老年医学 摘要 背景：肝癌是严重威胁人类健康的疾病之一，近几年来，肿瘤干细胞学说的 提出，为肝癌的研究指出了新的方向。肿瘤干细胞理论认为：肿瘤干细胞就是肿 瘤的种子细胞，是肿瘤发生、发展、维持的原始细胞，也是肿瘤复发转移的根本 原因。目前治疗肝癌的方法主要是手术、放疗、介入、生物治疗等，但是治疗后 复发率高，继发的药物耐药等现象的存在是肿瘤干细胞存在的结果，只有清除了 这些细胞，才能根治肿瘤。 ． 然而，肝癌干细胞的研究尚处于初步阶段，怎样去得到大量的肝癌干细胞是 目前研究的难点，因为无论是在外周血还是肝癌组织中肝癌干细胞的数量都是极 其有限的，肝癌干细胞的分离对肝癌的研究有很重要的意义，之前，研究者一般 cell 是采用免疫荧光活化细胞分选法(Fluorescence-activated sorting，FACS)或者是 cell 免疫磁珠分选法(Magnetic．activated 分离和鉴定具有肿瘤干细胞的特性的肝癌干细胞，但是存在很多不足。 2004年的香山会议上，曾益新首次提出：肿瘤干细胞不仅来源于成体细胞的 恶性转化，还来源于普通肿瘤细胞在化疗的刺激下，基因组不稳定性被诱导而生 外培养的人肺癌细胞进行化疗，成功的富集出肺癌干细胞。很多研究表明CD90 是肝CSCs细胞公认的表面标记物，Yang等发现，在众多的与各种干细胞相关的 表面标志物，表达CD90的细胞与肝脏潜在的致瘤能力是相关的，继续对这些细胞 进行表面标记物的分析发现部分细胞还表达CD44，CD44是透明质酸的一种细胞 表面受体，且在肝癌的侵袭及转移中起着重要作用。因此，本研究旨在建立一种 体外有效富集、鉴定具有肝癌干细胞特性的细胞亚群的方法，为进一步研究肝癌 治疗的新靶点提供新方法。 目的：1．体外模拟体内化疗方案，探索化疗条件，获取化疗残存细胞。 2．探索化疗前及化疗残存细胞形态学差别及CD90、CD44表达的差异性并分 析其意义。 方法：1．通过体外联合化疗富集获得化疗残存细胞，倒置显微镜下观察化疗 前后细胞形态的变化。 2．使用免疫细胞化学染色的方法检测化疗前后细胞表面标志物CD90、CD44 的表达情况。 3．使用流式细胞仪检测化疗前后细胞表面标志物CD90、CD44阳性细胞的百 分率。 结果：1．化疗前后肝癌细胞的形态学变化： 化疗前：细胞在贴壁前在显微镜下观察到的是均一的单个的圆形细胞，24小 时内贴壁，之后开始分裂增生，细胞呈汇合生长，排列紧密、轮廓清楚，连接成 片，形态多样，有梭形、多角形、多边形；化疗后：化疗后细胞数量明显减少， 细胞排列疏松，细胞皱缩成小球状。 2．流式细胞仪检测结果： 对照组标为①，稀释倍数100的标为②，稀释倍数50的标为③，稀释倍数 30的标为④，稀释倍数25的标为⑤，稀释倍数20的标为⑥。 (1)对照组和化疗残存组CD90+百分数比较： (19．044-0．16)％。 6组比较F值为4．240，P0．01，差异有统计学意义。对照组①与各组比较P 都小于O．01，差异有统计学意义。且随着稀释倍数的减少也就是随着药物浓度的 增加CD90阳性表达增加，当浓度增加的一定程度时在增加浓度CD90阳性表达反 而减少。 (2)对照组和化疗残存组CD44+百分数比较： CD44+细胞在①组的平均阳性率为(O．25士0．08)％，②组的平均阳性率为 (12．464-0．20)％。 6组比较F值为4．50，P0．01，差异有统计学意义。对照组①与各组比较P 都小于0．ol，差异有统计学意义。且随着稀释倍数的减少也就是随着药物浓度的 增