利福平抑制鱼藤诱导的多巴胺神经元凋亡的活体实验研究.pdfVIP

利福平抑制鱼藤酮诱导的多巴胺神经元捅亡的活体实验研究 利福平抑制鱼藤酮诱导的多巴胺神经元 凋亡的活体实验研究 专 业：神经病学 硕士生：张国华 导 师：陶恩祥教授 摘 要 一，研究背景 帕金森病(Parkinsonsdisease，PD)是一种中老年人常见的中枢神经系统 变性疾病，临床表现主要包括静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态不稳， 主要病理改变为黑质致密部多巴胺(Dopamine，DA)神经元进行性变性、死亡， 同时伴残存神经元内出现Lewyd,体。构成Lewyd、体的主要成份是可溶性洳突触 共核蛋白(a-synuclein)聚集形成的不溶性纤维积聚物。 近年来研究发现，细胞凋亡是引起PD多巴胺神经元丢失的主要机制。而在 PD的发病过程当中，细胞凋亡的发生与线粒体功能受损、氧化应激以及 a-synuclein的异常聚集密切相关。在基因突变及环境毒素的相互作用下，线粒体 功能出现失常，体内ATP生成减少、活性氧(reactiveoxygenspecies，ROs)逐渐增 的异常聚集又反过来促进线粒体功能异常和氧化应激，从而形成一个恶性循环并 最终导致细胞正常功能及代谢受到严重影响以及DA神经元的大量凋亡。因此， 线粒体、氧化应激和a-synuclein这三大因素逐渐被认为是PD治疗的新靶点，阻止 DA神经元凋亡的发生则被看作是PD治疗的新方向。 据报道，利福平除具有抗结核和抗麻风病治疗的作用外，还具有减轻氧化 利福平抑制鱼藤酮诱导的多巴胺神经元捐亡的活体实验研究 应激反应以及抗神经细胞凋亡的作用，从而提示了利福平可能具有治疗中枢神经 系统变性疾病的作用。此外，一大型流行病学研究显示，服用抗麻风病药物利福 平的麻风病人患老年性痴呆的几率明显减低，从而推测利福平可能有抑制B淀粉 样蛋白聚集的作用，而此作甩后来己被证实；而由于a-synuclein与D．淀粉样蛋 白具有共同的结构特点以及它们之间存在着相互作用，人们推测利福平可能也有 抑制a-synuclein聚集的作用。本课题组的近期研究证实，利福平在细胞水平上 具有抑制洳synuclein的形成和聚集并保护PCI2细胞免受环境毒素1．甲基-4．苯 关作用在活体中的研究提供了可靠的依据。 关系便成为近期关于PD发病机制及PD动物模型制作的研究热点。与M盯P一样 都是线粒体呼吸链复合体I抑制剂的鱼藤酮，由于其被广泛应用于农业，人类容 易少量长期与其接触。此外，鱼藤酮还具有亲脂性，可直接透过血脑屏障进入脑 组织并抑制线粒体复合物I的活性，引起氧化应激反应及细胞毒作用。少剂量慢 性接触鱼藤酮可选择性地引起动物体内黑质DA神经元的大量凋亡，十分适合用 于PD动物模型的制作． 基于上述的理论基础及研究结果，本研究选择了极具PD典型特征(如黑质 部位可见a-synuclein表达增多及大量多巴胺神经元丢失等)的鱼藤酮大鼠PD模型 为对象，旨在进一步研究利福平在动物体内对a-synuclein的形成和聚集以及环境 毒素诱导的DA神经元凋亡的抑制作用。 二、研究目的 1．构建在行为学、病理学及免疫组织化学方面均与人类帕金森病十分相似的PD 大鼠模型。 2．明确利福平在活体内具有减轻环境毒素对中脑黑质多巴胺细胞损伤的神经保 护作用。 3．证实利福平在活体内具有抑制环境毒素引起的Q—synuclein的形成和异常聚集 Ⅱ 利福平抑制鱼藤酮诱导的多巴胺神经元凋亡的活体实验研究 的作用。 4．阐明利福平在活体内具有对抗环境毒素诱导的多巴胺能神经元凋亡的作用及 其抗凋亡的终末路径． 5．为利福平应用于帕金森病的临床治疗提供了依据，为进一步对其保护作用的 具体机制的研究奠定了基础。 三、实验对象和方法 1．实验对象 体重250·3009。 2．动物分组及处理 将动物完全随机分为五组，正常对照组及利福平对照组各12只，鱼藤酮组、 利福平治疗组及利福平预防组各16只。 正常对照组每天只给予背部皮下注射葵花油；利福平对照组每天只给予利福 平灌胃；鱼藤酮组每天只给予背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳化液；利福平治疗组 在给予鱼藤酮一周后开始同时给予鱼藤