慢性脑缺血大鼠xr的表达及天麻钩藤饮的干预.pdf

郑州人学2007届硕l学位论史 中文摘要 慢性脑缺血大鼠OXR的表达及天麻钩藤饮的干预 研究生 吕瑞娟 导师 张博爱教授贾延劫副教授 郑州大学第一附属医院神经内科 河南郑州450052 中文摘要 Orexin(食欲素)是一类新发现的主要存在于下丘脑的神经肽，它由下丘脑 外侧区域特异神经元表达的前体蛋白prepro-orcxin经蛋白酶水解衍化而来，包括 现，急性脑缺血可以导致OXlR表达改变，但是慢性脑缺血能否导致OXR表达改 变在国内外尚未见报道。 血管疾病发病过程中的一个共同的病理过程，随着我国老龄人口比例不断增大， 慢性脑缺血带来的老年相关性疾病的发病率逐年增加，它困扰着许多老年人，给 社会、家庭带来沉重的经济和精神负担，防治慢性脑缺血带来的老年相关性疾病 日益显得至关重要。因此对慢性脑缺血相关疾病的发病机制及脑组织保护剂的研 究已成为关注的焦点。 近年来，随着对慢性脑缺血认识的加深，人们越来越认识到有效治疗慢性脑 缺血的重要性，开始寻找一些药物来阻止或延缓脑缺血所致的脑损伤，从而达到 有效防止慢性脑缺血相关疾病的发生、发展。药物治疗慢性脑缺血，尤其是中药 治疗慢性脑缺血具有成本低、靶部位多、不良反应少、危害小等优点；同时我国 是中药的发源地，有丰富的中药资源；另外由于先进的实验手段己广泛应用于中 药的实验研究，使中药实验研究的客观性大大提高，因此开展中药治疗慢性脑缺 血的研究十分具有可行性和广阔的发展前景。天麻钩藤饮具有平肝熄风、清热活 血、补肾益智之功效，现代药理研究表明天麻钩藤饮有改善脑缺血再灌注动物学 郑州人学2007如；I[61It学砭论文 中文摘要 习记忆障碍的作用。另有研究表明天麻钩麟饮能通过降低NMDA受体活性、抑 制兴奋性氨基酸神经毒性等途径发挥脑保护作用。 鉴于以上考虑，本研究首先通过结扎双侧颈总动脉法建立慢性脑缺血大鼠模 型，采用免疫组化、免疫荧光双标组化技术观察慢性脑缺血大鼠脑组织OXtR、 OX2R的表达及其随缺血时问的变化，探讨慢性脑缺血能否导致OXR表达变化及 其意义。在上述研究的基础上，探讨天麻钩藤饮能否通过Orexin系统发挥其脑保 护作用，从而进一步证实天麻钩藤饮对慢性脑缺血的治疗作用。 方法 1．动物分组108只SD大鼠(雌雄各半)，随机分为假手术组、模型组、治 疗组，每组又分为15d、30d、60d三个亚组，每个亚组12只。各假手术组仅行 颈前切开，不结扎颈总动脉，术后立即用蒸馏水(灌胃量与治疗组相当)灌胃 15d、30d、60d；各模型组分别于建模成功后立即用蒸馏水(灌胃量与治疗组相 钩藤饮(0．59．kg．1．d。)灌胃15d、30d、60d。 2．慢性脑缺血大鼠模型建造参照Yamada等制作慢性脑缺血大鼠模型的方 法制作模型。 3．大鼠学习记忆能力测试采用水迷宫法进行学习记忆功能测定。 4．脑组织切片制备和脑组织OXR的免疫组化表达测定及免疫荧光双标组 化和HE染色观察 各亚组大鼠于各自时间终点断头处死，处死后取脑组织，10％福尔马林固定、 常规石蜡包埋，连续冠状切片。 每只大鼠脑组织标本取连续切片，分别用OXtR、OX2R抗体进行免疫组化 染色。严格按sP染色试剂盒说明书进行免疫组化染色，光镜下采用盲法观察。 镜下在每张切片相同部位的皮质、海马区随机计数5个视野1000个细胞，计出 阳性细胞数。用图像分析仪分析每张切片ox2R在海马周围神经纤维着色的平均 灰度值。 每只大鼠脑组织标本取连续切片分别用OXlR、OX2R抗体与NSE抗体及其 荧光素标记Il抗严格按照免疫荧光双标组化染色步骤对OXR进行免疫荧光双标 组化染色，在激光共聚焦显微镜下观察OXR的表达。 II 郑州人学2007尉预I学位论文 中文摘要 取各组大鼠脑组织切片严格按照HE染色步骤进行HE染色，在光镜下观察。 5．统计学