先天性视网膜劈症基因突变分析.pdfVIP

先天性视网膜劈裂症基因突变分析 硕士研究生：王立华 指导教师：马翔 教授 专业名称：眼科学 摘 要 or 先天性视网膜劈裂症(X—Linked Retinoschisis，RS Congenital XLRS)是一种少见的x连锁隐性遗传病，主要累及双侧视网膜，造成 神经纤维层和神经节细胞层之间的劈裂，患者具有典型的车轮状中心 凹劈裂和视网膜电图b／a比值下降的特征性电生理改变。此病发生于男 性，女性作为携带者无临床症状或无特征性临床表现。近年来的研究 天性视网膜劈裂症基因，命名为XLRSl，该基因包含6个外显子，编码 表达于视网膜的光感受器细胞和双极细胞。Retinoschisin包含一高度保 守的环形区域(discoidin 环状区域一般见于一些与细胞粘附及细胞间相互作用有关的胞内及跨 膜蛋白家族中，因此，认为Retinoschisin与细胞之间相互黏着以及与 细胞表面磷脂问的结合有关，从而在视网膜的发育及维持视网膜结构 的稳定中扮演重要角色。已证明先天性视网膜劈裂症由XLRSl基因突 了133种不同致病XLRSl基因突变类型。本实验采用聚合酶链反应一 单链构象多态性(PCR．SSCP)方法结合银染技术对七个视网膜劈裂症 突变的筛查，并结合DNA序列测定，确定碱基突变类型。 方法：常规苯酚．氯仿方法提取淋巴细胞基因组DNA。聚合酶链反 应(PCR)分别扩增XLRSl基因的6个外显子寡核苷酸片段，所用引 ·1。 物参照文献报道合成，引物设计在内含子中以确保扩增片段包含整个 外显子和内含子与外显予的剪接位点。所得PCR产物经琼脂糖凝胶电 泳检测确认后，加热变性为单链，于聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，并 用银染技术显色观察结果。最后将PCR-SSCP发现有异常的PCR产物 纯化后进行DNA序列测定，确定碱基突变类型。实验以30名无眼病 家族史的健康人作为对照。 结果：1．共发现10种不同类型的致病基因突变，分别为碱基替换 TC。对照组未检测到突变。 (p．W163X)；剪接位点突变1种：c．52+2 56G为新发现的变异，目 45H、c．22delT、c．488delG、p．R1 2．其中P．D1 前未尚见有文献报道。3．80例实验样本中共检测到2l位突变携带者。 结论：先天性视网膜劈裂症是由于XLRSl基因突变所致，基因突 变的检测对于疾病的诊断、家系遗传咨询、以及进一步研究发病机制 和探索有效的治疗手段有十分重要的意义。 关键词： x．性连锁遗传性视网膜劈裂症 基因突变 聚合酶链反应．单链构象多态性DNA序列测定 The ofthe mutationofthe X—linked analysisgene retinoschisis juvenile Lihua Postgraduate：Wang Ma Supervisor：ProfessorXiang Speciality：Ophthalmology Abstract Juvenile orXLRS，MIM{!|}312700)isa