仪器分析-高效液相色谱法资料.pptVIP

一、高效液相色谱法的特点 1. 高效液相色谱法概述 2. 高效液相色谱与气相色谱的比较 4. 高效液相色谱法的特点 高压 高速 高效 高灵敏度 5. 应用举例 人参、西洋参与三七的鉴别 二、高效液相色谱理论基础 H=A+B/u+Cu A=2λdp B→0 C=? 迁移的流动相的传质阻力 滞留的流动相的传质阻力 高效液相色谱中的速率方程 涡流扩散项 纵向扩散 流动相传质 滞留区传质 固定相内传质 2. 对速率方程的讨论 选用细颗粒填料可获高柱效 流动相流速低，有利于达到高柱效 选用黏度小的流动相有利于提高柱效 温度的影响 液膜厚度的影响 3. 柱外效应 三、高效液相色谱仪 1. 高效液相色谱仪流程 2. 高压输液系统 往复泵原理示意图 梯度洗提 梯度洗提 即程序控制流动相的组成，使在整个分离过程中，溶剂强度按照特定的变化规律增加。 优点：分离复杂混合物，使所有组分都处在最佳的k值范围内。 缺点：检测器的使用受到限制，分析结果的重复性取决于流速的稳定性。柱子需进行再生处理。 应用举例 3. 进样系统 4. 分离系统——色谱柱 包括柱管与固定相两部分 一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm 凝胶色谱柱内径3～12mm 微柱内径1-2mm，长1-5cm 制备往内径较大，可达25mm 以上 5．检测系统 （1）紫外检测器 固定波长的紫外检测器 可变波长的紫外检测器 二极管阵列检测器 固定波长的紫外检测器 可变波长的紫外检测器 二极管阵列检测器 二极管阵列检测器之三维图 二极管阵列检测器之Isoabsorbance Plot 响应特性 选择性检测器，如芳烃类化合物的检测 灵敏度高，可检测10-9g/mL的物质 线性范围宽，104-105 对温度及流动相的改变不敏感 适合梯度洗提 HPLC常规检测器 应用举例 （2）示差折光检测器 响应特性 通用性检测器 低灵敏度 基线易受温度的影响 不适合梯度洗提 荧光检测器 响应特性 选择性检测器。如PAH，蛋白质 高灵敏度，比紫外高约1000倍 适合梯度洗提 应用举例 电导检测器 响应特性 选择性检测器，对离子型化合物有响应 灵敏度高 受温度的影响 不能梯度洗提 （5）几种检测器特性比较 四、HPLC主要类型及其选择 化学键合相色谱法 液固色谱法 离子对色谱法 离子色谱法 体积排阻色谱法 1. 化学键合相色谱法 （1）分离机理 正相键合相色谱法：固定相的极性大于流动相的极性，适用于分离油溶性或水溶性的极性或强极性化合物。 分配机理：分配系数 x为溶质，M为溶剂 反相键合相色谱法：固定相的极性小于流动相的极性，适于分离非极性、极性和离子性化合物。应用最广泛 反相键合相色谱法的疏溶剂机理： 溶质进入极性流动相后，排挤部分溶质分子，其疏水基团由于流动相的斥力推动而直接与非极性固定相上的烷基缔合，构成单分子吸附层，这种作用时可逆的。当流动相极性减小时，这种疏溶剂斥力下降。 （2）固定相 疏水基团 如不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等 极性基团 如氨丙基，氰乙基、醚和醇等。 应用举例 （3）流动相 表征溶剂特性的重要参数 溶剂强度ε°：溶剂分子与吸附剂的亲合程度，ε°越大，亲合力约大。 溶解度参数δ：衡量溶剂极性强度的指标，δ越大，极性越强。是溶剂和溶质分子间色散力、偶极力、接受质子或给予质子能力的总和。所以δ相近的混合溶剂，它的选择性α不同。 极性参数P’：溶剂与乙醇、二氧六环、硝基甲烷相互作用的度量，比较全面的反映了溶剂的性质。 粘度η： 溶剂的选择原则 溶剂具有稳定的化学性质 溶剂的选择与使用的检测器要有相容性 溶剂的粘度要小 溶剂的沸点不能太低 溶剂的纯度要高且价格便宜 溶剂选择分组 正相：正己烷、正庚烷、乙醚、二氯甲烷、氯仿等，己烷为主体，加入质子接受体乙醚或甲基叔丁基醚，质子给予体氯仿，偶极溶剂二氯甲烷 反相：水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、乙醇及其混合物等，以水为主体，加入质子接受体甲醇，质子给予体乙腈，偶剂溶剂四氢呋喃。 应用举例 2. 液固色谱法 （1）分离机理 以固体吸附剂为固定相的液相色谱法。由于溶质分子和流动相分子在吸附剂表面的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种竞争吸附形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡。平衡常数的不同导致不同溶质得以分离。 （2）固定相 极性固定相：硅胶、氧化镁、氧化铝等 非极性固定相：活性炭、高分子多孔微球、碳多孔微球等 （3）流动相 ε°越大，洗脱力越强。合适的洗脱强度可通过混合溶剂来得到 硅胶为固定相时：以弱极