第十五章微生物酶的生产资料.pptVIP

第十五章 微生物酶的生产 第一节 概述 第二节 合成原理 第三节 酶的生产工艺过程 第四节 其他酶的生产 化学工业出版社 学习目标 了解酶与酶制剂的概念、酶的催化特点及影响酶催化的因素；了解酶的合成原理；了解青霉素酰化酶、β-半乳糖苷酶、天冬酰胺酶的生产； 熟悉酶的发酵生产工艺流程； 掌握酶的发酵工艺条件控制、影响产酶的因素、酶的提取和精制方法和工艺要求。 第一节 概述 认识酶 酶是细胞原生质合成的一类具有高度催化活性的特殊蛋白质，来源于生物体，人们称它为“生物催化剂”，能够使生物体内发生各种各样的化学变化。 通过采取适当的理化方法，将酶从生物组织或细胞以及发酵液中提取出来，加工成具有一定纯度标准的生化制品，称酶制剂。 酶这类生物催化剂，除了具有一般化学催化剂的特性外，还有其独特的优点：催化效率高；专一性强；作用条件温和等。 温度 pH值 激活剂和抑制剂 蛋白水解酶 影响酶催化 因素 第二节 合成原理 酶的生物合成模式 同步合成型 又称为生长偶联型。属于这一类型的酶，其生物合成可以诱导，但不受分解代谢物和反应产物阻遏。而且去除诱导物或细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止。同步合成型酶，酶的合成与细胞生长同步进行，细胞进入对数生长期，酶大量产生，细胞生长进入平衡期后酶的合成随着停止。 中期合成期 酶的合成在细胞生长一段时间后才开始，而在细胞进入平衡期后，酶的合成随着停止。该类酶的特点是，其合成受反馈阻遏。 延续合成型 酶的合成伴随着细胞的生长而开始，但在细胞进入平衡期后，酶还可以延续合成较长的时间，该类酶可受诱导，但不受分解代谢物和产物阻遏。 滞后合成型 只有当细胞生长进入平衡期后，酶才开始合成并大量积累，该类酶在对数生长期不合成，可能是由于受到分解代谢物阻遏作用的影响，当阻遏解除后，酶才开始大量合成。 微生物酶合成的调节与控制 第三节 酶的生产工艺过程 酶的发酵生产工艺过程 包括：①原料处理，水解糖制备；②种子的扩大培养；③无菌空气的制备；④发酵控制；⑤成品提取、精制等过程 微生物蛋白酶发酵生产工艺 发酵培养中的工艺控制 培养基成分及其控制 菌体培养过程中基质主要控制以下成分：碳源、氮源、碳氮比、无机盐、生长因子、产酶促进剂等。 温度的影响及控制 酶生产过程中，为了有利于菌体的生长和酶的合成，可采用阶段控制温度，即在生长期，控制生长的最适温度，在酶的合成期采用生产的最适温度，但由于微生物合成酶的模式不同，所以应根据合成模式，来控制适宜的温度。 pH值对酶生产的影响及控制 酶生产适宜的pH值通常与酶反应的最适pH值相接近。但酶反应的最适pH值对某些酶来说可能是最不稳定的，应针对不同情况进行控制。酶生产的pH值控制，一般根据酶生产所需求的pH值确定培养基的碳氮比和初始pH值，在一定通气搅拌条件的配合下，使培养过程的pH值变化适合酶生产的要求。但是，也有在培养基中添加缓冲剂使其具有缓冲能力以维持一定pH值的；也有在培养过程中当培养液pH值过高时添加糖或淀粉来调节，pH值过低时用通氨或加大通气量来调节的。此外，也有用补料来控制培养基的碳氮比与pH值。 溶解氧对酶生产的影响 酶生产所用的菌体一般都是需氧微生物，培养时都需要通风搅拌，但培养基中溶氧的浓度因菌种而异。 泡沫和消沫剂 发酵过程中，泡沫的存在会阻碍CO2排除，直接影响氧的溶解，因而将影响微生物的生长和产物的形成。采取消泡措施加以控制。 添加诱导剂和抑制剂 某些诱导酶，在培养基中不存在诱导物质时，酶的合成便受到阻碍，而当有底物或类似物存在时，酶的合成就顺利进行。 酶的提取和精制工艺过程 酶的提取和精制方法 酶的提取 提取过程大致分为发酵液的预处理、酶的沉淀或吸附和解脱几个步骤。主要方法有盐析法和有机溶剂沉淀法，也有采用单宁沉淀法和吸附法的。 酶生产的精制 酶生产的精制过程，主要有除杂、脱盐、浓缩、结晶、干燥等过程。 ①杂质的除去 酶提取液中，除所需酶外，还含有大量的杂蛋白、多糖、脂类和核酸等，为了进一步纯化，可用下列方法除去： 调pH值和加热沉淀法、蛋白质表面变性法、选择性变性法、降解或沉淀核酸法 、利用结合底物保护法除去杂蛋白 ? ②脱盐 酶的提纯以及酶的性质研究中，常常需要脱盐。最常用的脱盐方法是透析和凝胶过滤。 ③浓缩 酶的浓缩方法很多，有冷冻干燥、离子交换、超滤、凝胶吸水、聚乙二醇吸水等。 冷冻干燥法是最有效的方法，它可将酶液制成干粉。这种方法既能使酶浓缩，酶又不易变性，便于长期保存。 ④酶的结晶 把酶提纯到一定纯度以后(通常纯度应达50％以上)，可进行结晶，伴随着结晶的形成，酶的纯度经常有一定程度的提高。 酶的结晶方法主要是缓慢地改变酶蛋白的溶解度，使其略处于过饱