牙菌斑及胃粘膜门螺杆菌耐药基因检测的临床价值.pdfVIP

中文摘要 牙菌斑及胃粘膜幽门螺杆菌耐药基因 检测的I临床价值 摘 要 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H．pylori)为微需氧菌，是 一端有鞭毛的螺旋形革兰氏阴性菌，已确认该菌与胃肠道4 种疾病即慢性胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关性淋巴瘤 tissue mucosa·associated (gastric lymphoid 及胃癌密切相关。全球H．pylori的人群感染率超过50％。根 除H．pylori不仅可以加速溃疡的愈合、减少溃疡复发，而且 可以降低胃癌发生的危险性。 由于根除疗法的推广应用，H．pylori对部分抗生素的耐 药性变得日益严重，已明显影响到部分H．pylori的治疗方案 根除率。因此，幽门螺杆菌耐药基因的检测对判断耐药性，指 导临床用药。具有重要指导价值。 克拉霉素是根除H．pylori最有效的抗生素，随着克拉霉 素在临床的广泛应用，H．pylori对克拉霉素的耐药率逐渐增 高，明显降低了含克拉霉素方案的根除率。研究表明50A-20 ％的患者对克拉霉素耐药。克拉霉素耐药可以使根除率降低 55％，因此临床上迫切需要一种快速、准确地诊断H．pylori 对克拉霉素耐药的检测方法。分子方法检测H．pylori对克拉 霉素耐药性是一种快速、准确的方法。 国内外研究报道，H．pyl面对克拉霉素耐药的产生与 nucleotide 23SrRNA基因上的单核苷酸多态性(singte 中文摘要 所以细菌对克拉霉素的耐药性可以通过检测特定位置的 SNP获得。 等位基因特异性引物一聚合酶链反应(allele specific chain primer-polymerase 多态性(st,ms)的方法之一，可以应用PCR扩增方法短时间内 检测SNPs，不再需要限制性内切酶进行酶切或对产物的直 接测序。ASP-PCR方法特意设计引物3’末端的第三个碱基 为错配碱基；设计37末端的第二个碱基为SNP位点的互补 碱基。当第二个碱基与SNP位点上的碱基互补结合时，PCR 的扩增可以继续进行，反之则不能。这样SNPs可以通过观 察相应的特异性引物的PCR扩增产物有或无来确定。 国外研究报道，23SrRNA基因的点突变分别产生了 胃内H．pylori再感染的来源。通过牙菌斑取材，检测幽门螺 杆耐药基因具有简单，快速，便于临床开展的特点，具有较强 的临床价值。 目的： 本实验通过胃粘膜取材建立等位基因特异性引物一聚合 rRNA基因2142及 酶链反应法(ASP．PCR)检测H．pylori23S rRNA基因突变情况。 方法： 检查的患者83例，其中包括16例慢性胃炎、60例溃疡和7 中文摘要 断依据快速尿素酶试验、组织学检查及14C呼气试验，此三 用SPSSl2．0软件包进行统计分析，两种方法阳性率的比较 采用x2检验。 2收集“C呼气试验和快速尿素酶试验均为H．pylori阳性的 患者45例，包括慢性浅表性胃炎23例，十二指肠溃疡22 23S BbsI进行酶切。 结果： 1例发生A2143G突变，6例为野生株与A2143G突变株的 混合株。所有突变株均经测序证实。突变率10．8％，准确性 阳性产物进行限制性酶切分析，有7例被BsaI切开，表明 存在A2143G的突变，无一例被BbsI识别。所有突变株均 经测序证实。 rRNA 23S 了H．pylori