突触素在大鼠局性脑缺血再灌注损伤和慢性糖尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的表达和意义.pdfVIP

突触素在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤和。慢性糖 尿病大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的表达和意义 硕士研究生：宋或琳 指导教师：何祥 教授 专业名称：内科学 摘 要 慢性糖尿病和脑缺血再灌注损伤是引起认知障碍的两个主要危险 因素，海马在人和动物学习、记忆整合中起主要作用，认知障碍与海 马区神经元变性、坏死、缺失有密切关系。慢性糖尿病和脑缺血再灌 注损伤均出现了海马神经元变性、坏死，出现认知障碍症状。突触素 (Syp)是一种突触囊泡膜上的钙结合蛋白，广泛分布在大脑、延髓等 中枢神经系统。Syp在海马的神经毡区成颗粒或点状免疫标记，神经元 胞体、胶质细胞、白质及血管不被标记，因此该蛋白在研究领域被广 泛用于标记突触终末，是突触重建的重要标志之一，突触素的检测能 较好的反应神经元和轴突的代偿再生隋况。本研究采用了STZ诱导慢 性糖尿病和线栓法建立了慢性糖尿病大脑中动脉闭塞(MCAO)模型， 用免疫组化方法和HE法观察海马神经元缺失和突触素在大鼠脑缺血再 灌注和慢性糖尿病大鼠脑缺血再灌注后海马神经元损伤中的表达，以 探讨糖尿病是否为再灌注损伤后海马神经元迟发性细胞死亡、变性的 加重因素和中枢神经系统的可塑性，为临床防治提供理论基础。 目的：建立慢性糖尿病脑缺血再灌注模型及观察突触素(Syp)在 损伤海马神经元的表达以探讨糖尿病是否为再灌注损伤后海马神经元 迟发性细胞死亡，变性的加重因素和中枢神经系统的可塑性 医科大学实验动物中心提供)，随机分为4组：①正常对照组(n=5)i ‘1。 ②假手术组(n=5)；⑨缺血再灌注组(舻5)；④慢性糖尿病脑缺血再 7d、14d等时间点，每个时间点n=5。慢性糖尿病模型Ⅲ建立：于大鼠 16．7mol·L‘1的大鼠判定为糖尿病大鼠，饲养40天。脑缺血再灌注模 型的建立：参照Longa[2l报道的线栓法建立大鼠MCA闭塞／再灌注模型， 在10％水合氯醛(0．39·kg‘1)腹腔麻醉下左心室插管，4％多聚甲醛灌 流取脑，固定，浸蜡、包埋，连续切片，分别进行HE和Syp免疫组 化染色(SABC法，DAB显色)。光镜下半定量计数100pm长度内的 海马CAl区结构完整的正常锥体细胞数、图像分析系统测量切片海马 一时间点，假手术对照组，DM组和缺血再灌注组分别比较，进行F 检验。 结果：HE染色脑缺血再灌注组3d时、海马CAl区神经元开始减 少、5d神经元减少最重，慢性糖尿病组脑缺血再灌注后24h海马神经元 果显示：脑缺血再灌组6h和24h Syp的免疫活性未见明显变化、第3d 免疫活性增高、7d达高峰、14d明显下降，而DM组6h Syp免疫活性 未见明显变化、24h免疫活性增高、5d免疫活性达高峰、14d明显下降， 两组与假手术组比较有显著统计学差异(p0．01)，两组问比较无统计 学差异(p0．05)。 讨论：慢性糖尿病和脑缺血再灌注损伤是引起认知障碍两个主要 危险因素。海马在人和动物学习、记忆整合中起重要作用，认知障碍 与海马区神经元变性、坏死、缺失有密切关系。我们研究发现，慢性 糖尿病作为附加因素，可进一步加重脑缺血再灌注海马神经元损伤， 并且以海马区细胞凋亡形式为主。我们推测这种损伤机制可能¨。为： ①高血糖的毒性作用②局限性脑血流量减少，缺氧和能量代谢障碍⑨ 胰岛素缺乏；④脑内某些有保护作用的神经肽含量下降。 突触素是一种位于突触囊泡膜上，分子量为38KDa的钙结合蛋白， ·2。 它在突触囊泡的转运、入坞及其内容物释放过程中均发挥重要作用。 突触素分布广泛，在大脑、延髓髓质、脊髓、小脑、视网膜、肾上腺 髓质及各类内分泌细胞都有分布¨。71。免疫电镜研究证实，突触素位于 小圆形或扁形突触囊泡质膜面，光镜下标记的突触素颗粒样物实际上 是成簇的囊泡¨3。突触素在海马的神经毡区呈现颗粒状或点状免疫标 记，神经元胞体、胶质细胞、白质及血管不被标记¨。。因此，该蛋白 在研究领域被广泛用于标记轴突终末，是突触重建的重要标志之一。 本研究试验通过