慢性高眼压大鼠型建立和嘌呤受体p2xlt;,7gt;与a3对视网膜神经节细胞作用的体内研究.pdf

慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体P2X7与A3对视网膜神经节细胞作用的体内研究 中文摘要 慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体P2X7与A3对 视网膜神经节细胞作用的体内研究 专 业： 眼科学 学位申请人： 胡慧玲 导 师： 张秀兰教授 中文摘要 研究背景： 青光眼是全球第二位致盲性眼病，其防治己成为重要的公共卫生问题。升高的 眼内压是青光眼发生和进展的最主要危险因素，其导致的最终结局是视网膜神经节 细胞(RGCs)凋亡。然而，高眼压下RGCs凋亡的机制尚未完全清楚。已有研究表 明神经营养物质的剥夺、兴奋性谷氨酸的毒性及一氧化氮的氧化损伤等都与其相 关。近年研究发现，嘌呤及其受体也参与了RGCs存活与凋亡的调节。前期研究表 及其受体A3的激活具有拮抗RGCs凋亡作用。但以上结果仅来源于体外细胞实验，嘌 呤受体的体内作用亟待证实。然而，进行体内作用研究的前提是要有较为理想的动 物模型。 慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体P2X7与A3对视网膜神经节细胞作用的体内研究 中文摘要 目前研究中常用的高眼压动物模型有急性和慢性两种，慢性高眼压模型是研究 RGCs凋亡的主要手段，常用的造模方法有激光光凝、静脉烧灼等。但这些模型大部 分仅着眼于高眼压产生的某一方面机制，有一定局限性。采用巩膜表面静脉注射高 渗盐水法建立的大鼠慢性高眼压模型，其在发生机制上与人类青光眼最相近，是一 种较好的研究青光眼的手段。 本课题拟采用巩膜表面静脉注射高渗盐水法建立大鼠慢性高眼压模型。首先检 测玻璃体腔三磷酸腺苷(ATP)浓度及视网膜NTPDasel蛋白表达水平，探讨慢性高 眼压状态下的嘌呤水平。其次，在大量体外研究结果基础上，研究ATP受体P2X7及 腺苷受体A3对体内RGCs凋亡及存活的作用。本研究建立的慢性高眼压大鼠模型，为 后续研究提供了较好的高眼压大鼠供体；通过探讨嘌呤及其受体在青光眼发病机制 及神经保护中的作用，为青光眼研究提供新的视角，为青光眼干预治疗提供可能的 靶点，具有一定的研究意义。 本课题的研究主要分为以下三个部分： 第一部分 慢性高眼压大鼠模型的建立 一、研究目的： 采用巩膜表面静脉注射高渗盐水法建立大鼠慢性高眼压模型，分析RGCs凋亡趋 势，为后续的实验研究提供稳定可靠的慢性青光眼大鼠供体。 二、 研究方法： 采用成年雄性Brown．Norway大鼠，右眼为对照组，左眼为实验组。实验组巩 膜表面静脉注射1．75M高渗盐水，建立慢性高眼压大鼠模型。以TonoLab眼压计于术 前一周至术后14天每日固定时间监测清醒状态下双眼眼压变化。实验组术后14天内 眼压平均值高于对照组5mmHg视为眼压增高。在146只大鼠造模尝试成功基础上，对 11只成功造模的大鼠进行数据分析。术后第14天，上丘逆行标记RGCs，术后第17 II 慢性高眼压大鼠模型建立和嘌呤受体P2X7与A3对视网膜神经节细胞作用的体内研究 中文摘要 天，视网膜平铺片并计数，分析高眼压下RGCs凋亡规律。如RGCs凋亡呈青光眼性 RGCs凋亡规律，结合眼压增高，视为造模成功。 三、研究结果： 11只成功建立的大鼠慢性高眼压模型中，实验组术后3—5天眼压开始升高，比较 mmVS．18．74-0．2mm 术后14天眼压平均值，实验组明显高于对照组(27．14．1．9Hg Hg， 化趋势符合青光眼性RGCs凋亡规律，由周边到中央区域RGCs数量分别减少29。8％、 19．9％、19．2％(p0．05)。 四、小结： 成功建立慢性高眼压大鼠模型，其RGCs凋亡符合青光眼性RGCs凋亡规律，可以 用于后续研究。 第二部分 慢性高眼压大鼠模型玻璃体液ATP及视网膜NTPDasel蛋白水平 测定 一、研究目的： 在成功建立的慢性高眼压大鼠模型中，研究高眼压下玻璃体液ATP浓度、视网膜 NTPDasel蛋白表达水平与眼压的关系。 二、 研究