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褪黑素预处理对新生期反复惊厥所致神经行为损伤的干预及机制初探 中文摘要 褪黑素预处理对新生期反复惊厥所致神经行为损伤 的干预及机制初探 中文摘要 目的：探讨褪黑素预处理对三氟乙醚所致新生期反复惊厥大鼠远期神经行为、海 马苔藓纤维再生性发芽及相关分子表达的影响。 方法：生后 6d （用P6 表示，下同）的健康 Sprague-Dawley （SD）大鼠72 只随 机分为四组(n=18 只/组) ：正常对照组（Contrast, CON 表示）、褪黑素空白对照组（MEL 表示）、惊厥组（Recurrent Seizures ，RS 表示）及褪黑素组（RS+MEL 表示）。通 过三氟乙醚反复吸入建立新生期大鼠反复惊厥动物模型： RS 组每日吸入三氟乙醚诱 导惊厥发作 5 次，每次间隔 30min，连续 9d ；CON 组与 RS 组同样操作但不吸入三 氟乙醚；RS+MEL 组于惊厥前 1h 腹腔注射 55mg/kg 褪黑素（Melatonin, MEL ），同样 方法吸入三氟乙醚诱导惊厥发作，操作同 RS 组; MEL 组，与 RS+MEL 组同样操作但 不吸入三氟乙醚。末次惊厥后 3h, 每组各随机取 6 只大鼠共 24 只，分别取大脑皮质 及海马，用免疫印迹技术（Western blot ）检测Beclin-1 、Bcl-2 的表达。于生后P24 ， P31 进行神经行为学评分（平面翻正实验、负向趋地反应实验、悬崖回避实验、前肢 悬吊实验）；于 P28-P35 天行 Morris 水迷宫试验，于 P35 天行旷场行为试验，测试 大鼠学习记忆功能及认知情感能力。于 P35 天行为学测试结束后分别取大脑皮层及海 马组织，用免疫印迹技术（Western blot ）检测锌离子转运体3 （ZnT3 ）、钙/钙调蛋白 依赖性蛋白激酶 II （CaMKII ）、ACAT-1 以及 Cathepsin E 的表达。于 P35 天采用 Neo-Timm’s 染色法观测海马苔藓纤维发芽的程度及分布情况。 结果：1、免疫印迹法显示：（1）RS 组海马和皮质中急性期 Beclin-1 的表达明显 高于 CON 组（P ＜0.05 ）；与 RS 相比，RS+MEL 组 Beclin-1 在海马和大脑皮层的表 达均明显降低（P ＜0.05 ）。RS+MEL 组与 CON 组相比无明显差异（P ＞0.05 ），CON 组与 MEL 组相比无明显差异（P ＞0.05 ）。（2 ）RS 组海马和皮质中急性期 Bcl-2 蛋白 的表达明显低于CON 组（P ＜0.05 ）；与RS 相比，RS+MEL 组 Bcl-2 在海马和大脑皮 I 中文摘要 褪黑素预处理对新生期反复惊厥所致神经行为损伤的干预及机制初探 层的表达均明显升高（P ＜0.05 ）。RS+MEL 组与 CON 组相比无明显差异（P ＞0.05 ）， CON 组与 MEL 组相比无明显差异（P ＞0.05 ）。 2、行为学结果：（1）与CON 组相比，RS 组（P24 、P31 ）负向趋地反应时间和 悬崖回避时间均明显延长（P ＜0.05 ），平面翻正时间、前肢悬吊时间（P24 、P31 ） 明显缩短（P ＜0.05 ）；与 RS 组比较，RS+MEL 组大鼠（P24 、P31 ）负向趋地反应 时间和悬崖回避时间均明显缩短（P ＜0.05 ），平面翻正时间、前肢悬吊时间（P24 、 P31 ）明显延长（P ＜0.05 ）。（2 ）旷场实验显示：RS 组延迟时间较 CON 组明显延 长（P ＜0.05 ）；RS 组水平运动次数少于 CON 组（P ＜0.05 ）, 而 RS+MEL 组较 RS 组增多（P ＜0.05) 。（3 ）Morris 水迷宫检测：〈1〉四组逃避潜伏期于测试第 1d 至第 5d 有逐渐缩短趋势;测试第 2,4,5 天，RS 组逃避潜伏期较 CON 组明显延长（P ＜ 0.05 ）,RS+MEL 组逃避潜伏期较 RS 组明显缩短（P ＜0.05 ）。〈2 〉空间探索测