sars冠状病致肺部炎症和肺损伤机制及糖皮质激素调节作用的研究.pdf

本课题受 上海市科技发展基金项目(03DZl9618) 资助 中文摘要 中文摘要 【目的】SARS是新出现的一种具有很强传染性的呼吸道疾病，现已确定其病原 体是一种新型的冠状病毒。目前对其发病机制还了解很少，因此临床还缺乏特异 有效的治疗手段。本研究以SARS冠状病毒N蛋白复制大鼠肺部炎症模型，研 究此动物模型肺部炎症反应特点以及糖皮质激素对其炎症反应的调节作用；并进 一步研究SARS冠状病毒N蛋白致人II型肺泡上皮细胞(A549)炎症反应特点 及糖皮质激素调节作用，从而在体内和体外两方面来探讨SARS发病机制，并为 糖皮质激素治疗SARS提供实验依据。【方法】(1)SARS肺炎动物模拟模型的 建立及其肺部炎症反应特点和糖皮质激素的调节作用。大鼠气管内滴入SARS病 毒N蛋白溶液(O．2mg／kg)复制大鼠SARS肺部炎症模型。将大鼠随机分为生理 和地塞米松组(D组，腹腔注射地塞米松10mg／kg)。对4组大鼠的外周血、支 气管肺泡灌洗液(BALF)、肺组织进行细胞学、病理学研究，测定肺组织湿／于 (2)SARS冠状病毒N蛋白对人1I型肺泡上皮细胞(A549)生长活性的影响。 实验分对照组和3个实验组(加N蛋白，使其浓度分别为O．2u∥m1、2isg／ml、 11 20 响。实验分1h、2h、4h、6h、8h组，每组又分为定标孔、对照孔、实验孔(加 N蛋白，使其终浓度为20u∥m1)，流式细胞仪检测A549表面ICAM一1的表达。 (4)SARS冠状病毒N蛋白对A549细胞分泌炎症性细胞因子的影响及糖皮质 激素的调节作用。实验分空白对照组(C组)、实验组(分P4h、P6h、P12h组，加 冠状病毒N蛋白溶液的同时加入地塞米松，浓度为104M)，采用ELISA法检测 N蛋白作用后细胞培养上清中IL一6、IL．10、TGF一0l的浓度变化及糖皮质激素 干预后上述细胞因子的浓度变化。(5)SARS冠状病毒N蛋白对A549细胞炎症 性细胞因子mRNA表达的影响。实验分空白对照组、实验组(分2h、6h组， u 加SARS冠状病毒N蛋白，使其终浓度为20 g／m1)，采用RNA提取试剂盒提 1 取总RNA，RT-PCR半定量法检测A549细胞IL．6、IL一10、TGF—BmRNA及 MMP．9 mRNA的表达。(6)采用SPSSl0,0医学统计软件，变量以平均数±标准 差(SD)表示，多组间均数的比较采用单因素方差分析，两组问比较采用t检验。 【结果】(1)SARS肺炎动物模拟模型成功建立①外周血淋巴细胞比例P2组(50．5 中文摘要 (P0．05)：P1、P2组BALF中自细胞分类与对照组相似，均以肺泡巨噬细胞占 肺组织病理变化：肺泡间隔增宽，有较多炎性细胞浸润，包括淋巴细胞、单核细 胞、巨噬细胞、中性粒细胞和成纤维细胞；P1组肺损伤无明显加重；D组浸润细 胞数量明显减少。⑤P1组血清及BALF中IL．6、IL一10、TGF一01浓度较NC组 TGF-B 3 1浓度较P2组显著降低(p0．01)。(2)0．2it g／ml、2ug／ml、20ug／ml 个浓度N蛋白对A549细胞生长均有抑制作用(表现在N蛋白作用48小时后)， 其中以20u∥m1浓度抑制性最强。(3)与空白对照组相比，N蛋白作用后的各 实验组细胞ICAM．1表达量无明显变化。(4)加入SARS冠状病毒N蛋白后， 4h、6h、12h A549细胞培养上清中IL．6、IL一10、TGF—B1浓度与对照组比较， 均有增加，除P4h组IL．6与对照组比较差异无统计学意义(P0．05)外，差异均 均有降低，差异有统