伊布利特对兔左中层细胞快钠电流活性的影响.pdf

中文摘要 伊布利特对兔左室中层细胞快 钠电流活性的影响 摘 要 目的：心律失常是临床上的常见病、多发病，特别是 室性心律失常，是心源性猝死的主要原因。虽然非药物治 疗快速性心律失常进展迅速，但抗心律失常药物治疗仍是 当前心律失常治疗最常用的方法。为此继续寻找安全有效 的抗心律失常药物仍然是目前心血管领域的重要任务之 一。近年来研究表明新型III类抗心律失常药物一伊布利 特，主要通过延长动作电位时程和有效不应期来终止折返 激动，在多数临床试验中证明有快速转复房颤、房扑的作 用而成为治疗心律失常的主要药物之一。有动物实验表明， 伊布利特可以通过延长心室不应期，抑制室性心律失常的 发生，临床上对冠脉疾病患者的电生理研究发现，使用伊 布利特后单形性室速的发生率明显下降，且心室肌的有效 且呈剂量依赖性。研究发现室壁中层的心肌细胞，即M细 胞具有独特的电生理特性：如较负的静息电位、较大的O 相上升速度(Vmax)、动作电位呈典型的“峰和圆顶，且 时程很长，无4相自动除极等，这些特点决定了M细胞在 触发性和折返性心律失常发生中起重要作用。为了避免室 壁异质性，本研究以酶解法分离新西兰大白兔左室前壁中 层M细胞，采用全细胞膜片钳记录技术直接记录不同浓度 伊布利特对左室中层M细胞快钠通道的影响，从而探讨其 中文摘要 抗室性心律失常的部分离子通道机制。 材料与方法： 1实验动物：新西兰纯种大耳白兔60只，由河北医 科大学实验动物中心提供，雌雄不拘，体重1．5-～2．0kg。 随机抽取10只兔作为正常对照组(Con)，25只兔作为伊 布利特低浓度组(10一mol／L)，25只兔作为伊布利特高 浓度组(10～mol／L)。 2细胞分离：利用酶解(胶原酶I，Sigma公司)的方 法分离心室肌细胞，三组细胞均来源于左心室前壁中层， 即M细胞。定位方法：用眼科剪剪去心外层1～1．5mm及 心内层1～1．5mm心肌组织，留取中层2～3mm的心肌组 织及为中层细胞。 ．3给药方法：分别把伊布利特纯品(由北京红惠生物 制药股份有限公司提供)溶解于INa细胞外液中使伊布利特 终浓度达到10～mol／L、10一mol／L，分别用含有不同浓度 伊布利特的细胞外液灌流细胞，流速2ml／min，大约3～5 分钟。 4电流记录：应用膜片钳全细胞记录方法，记录伊布 I．V曲线、 预下左室中层M细胞lNa活性的变化，包括INa 稳态失活曲线及失活后再恢复曲线。并与正常对照组进行 比较分析。电流记录的刺激程序由pulse+pulsefit软件控 制，通道信号经EPC一9膜片钳放大器放大，通过Ag—AgCI 电极丝和填充电极内液的微电极导入细胞，产生的电流信 号经EPC．9转换，为pulse+pulsefit软件采集、分析。 5统计学分析：应用SPSS10．0软件包进行统计学分 中文摘要 析。计量资料以均数±标准差(i±s)表示，首先进行组 间均衡性检验，两组计量资料采用t检验，成组资料问比 较采用方差分析，率(％)的比较用x2检验，以PO．05 为有显著性差异的标准。 结果： 1； I_V曲线的影响 1伊布利特对兔左室中层细胞INa 观察正常对照组、伊布利特高浓度组(1075mol／L)及 伊布利特低浓度组(10-6mol／L)左室中层细胞所记录的原 始INa电流形态曲线。三组细胞INa的I—V曲线，均在一70mV 激活，一20mV达峰值，+50mV时反转。应用伊布利特干 预组与对照组相比，I—V曲线上移，以伊布利特高浓度组 活电位、峰值电位、反转电位及I．V曲线的形态轨迹均无 影响。 ±4．33pA／pF(n=12 为--25．48±3．43 cells)，峰值电流密度较对 pA／pF(n=14