乳腺癌细胞stt3信号转导通路及与syk基因表达之间相互关系的研究.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………．5 研究论文乳腺癌细胞STAT3信号转导通路及与Syk基因表达之间相互 关系的研究 引言………………………………………………………………1O 第一部分RNA干扰沉默Sn玎3基因表达对人乳腺癌细胞生物学行为 的影响 前言………………………………………………………………1‘1日¨舌…………：…………………………………………………．． 材料与方法…………………………………………………………11 结果…………………………………………………………………．23 附图…………………………………………………………………．26 附表…………………………………………………………………．35 讨论…………………………………………………………………．37 小结…………………………………………………………………．38 参考文献…………………………………………………………．．38 第二部分槲皮素诱导人乳腺癌细胞凋亡及与Syk基因表达之间相互 。关系的研究 前言…………………………………．．……………^……………．41HU舌…………………………………．．……………．，……………．．1 材料与方法一……………．．………………………………………．．4l 结果………………………………………………………………44 附图…………………………………………………………………46 附表…………………………………………………………………48 讨论…………………………………………………………………50 小结…………………．‘……………………………………………．．50 参考文献……………………………………………………………．51 结论………………………………………………………………………．52 综述RNA干扰技术的研究及进展……………………………∥……．．53 致{射………………………………………………………………………．63 个人简历…………………………………………………………………．64 中文摘要 乳腺癌细胞STAT3信号转导通路及与Syk基因表达 之间相互关系的研究 摘 要 目的：槲皮素(Que)可诱导癌细胞氧化应激反应，检测在氧化 细胞凋亡的诱导作用及与Syk基因表达之间的相互影响。以STAT3为 靶基因，设计并构建能够产生小发卡RNA(shRNA)的重组质粒载体， MDA．MB．23 1／Syk细胞株STAT3表达之间的相互影响，来探讨其相关 信号转导途径，为乳腺癌的基因治疗提供实验和理论依据。 方法： 1用逆转录．聚合酶链式反应(revers PCR，RT-PCR)、蛋 transcription 白质印记技术(Western 达。． 接近)处理48小时后MDA—MB．23 MDA．MB．23 1及MDA．MB．23 1／Syk细胞中的表达情况。 3采用RNAi技术特异性沉默MDA．MB．231及MDA．MB．23l／Syk细 胞中STAT3的表达，通过Westernblot技术和半定量RT-PCR法检测 水平的变化；在荧光显微镜下观察细胞转染48h后的形态和荧光数， 以判断转染的效率；瑞士．吉姆萨染色观察细胞转染48h后细胞形态 学变化。 4经RNAi技术特异性沉默MDA．MB．231及MDA．MB．23 1／Syk细胞 中STAT3的表达后，流式细胞技术分析对细胞凋亡的影响，通过半定 量RT-PCR法检测细胞凋亡相关基因bcl．2和Bax表达的变化。 5采用RNAi技术干预MDA．MB．231及MD