大肠癌中egf、ras蛋白表达及k-ras基因突变的研究.pdf

硕士生姓名： 单宝珍 寺旨导教师： 刘丽娜 教授 专业名称： 内科学 摘 要 背景与目的：大肠癌的发生与多种信号转导通路的功能异常有关， 其中的Ras／MAPK信号转导通路是细胞外信号由膜外受体通过一系列基 因诱发细胞核内反应的重要通路，其上游的EGFR基因是一种跨膜糖蛋 白，在多种肿瘤包括大肠癌中均存在高表达。处于EGFR下游的K．ras 癌基因为细胞外信号从EGFR传至胞内的中介，在大肠癌中被认为是启 动癌变的关键基因之一，其主要以点突变的方式活化，且常见的突变位 2、1 点位于第2外显子第1 3密码子中。大量研究表明，EGFR、K．ra$ 基因与大肠癌的发生发展关系密切，但与大肠癌具体生物学行为间的关 系的结论并不一致，且目前国内外将两者结合用于在大肠癌中的蛋白表 达的研究尚未见报道。本研究通过检测大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏膜中 EGFR、Ras蛋白的表达情况，以及他们与临床病理特征的关系，旨从蛋 白水平探讨两基因在大肠癌发生中的作用。另外通过分析部分大肠癌组 织中K．ra8基因突变状况及其与Ras蛋白表达的相关性，进而从基因水 平探讨K．ras基因在大肠癌发病中的作用机制。 方法：诊断明确的大肠癌手术切除标本115例，其中43例取癌旁黏 膜组织(距肿瘤边缘≥5em)，另取内镜下切除大肠腺瘤标本36例。应 用免疫组织化学方法检测EGFR、Ras蛋白在大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏 膜组织中的表达，分析两种蛋白表达与临床病理间的关系；从115例大 肠癌组织中随机选取70例，用PCR扩增一直接测序法检测K．ra8基因第 2、1 2外显子1 3密码子突变，分析K．ra8基因突变对Ras蛋白表达的影 响及临床意义。 结果：1．EGFR蛋白阳性表达率在大肠癌、大肠腺瘤与癌旁黏膜组 分别为62．6l％(72／1 显著性差异(PO．05)；Ras蛋白阳性表达率在大肠癌、大肠腺瘤与癌旁 两者明显高于后者(P0．05)。 2．在大肠癌浸润深度达黏膜下层和肌层、浆膜下层及侵透浆膜层组 EGFR蛋白阳性表达率分别为36．84％(7／1 (12／1 者性别、年龄、肿瘤部位、分化程度、有无淋巴结转移及远处转移无明 显相关性(P0．05)。 3．在低分化癌与高中分化癌组中Ras蛋白的阳性表达率分别为 59．52％(25／42)与3 蛋白的表达与大肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、有无淋巴 结转移及远处转移无明显相关性(PO．05)。 5．选取的70例大肠癌中K．ras基因突变率为3O％(2 1／70)；其中第 1 4／2 2位密码子突变占66．67％(11)，突变位点均位于K—ras基因第12位 1 密码子第l、2位碱基上(G—T突变4例，G—C突变2例，另一例有G— 与44．44％(1 肠癌患者年龄、肿瘤部位、浸润深度、有无淋巴结转移及远处转移无明 显相关性(P0．05)。 结论：1．癌旁黏膜、大肠腺瘤与大肠癌中EGFR和Ras蛋白表达依 次上调，提示两者与大肠癌的发生有关。 2．大肠癌组织中EGFR蛋白的表达与肿瘤浸润深度呈正相关。 3．大肠癌组织中Ras蛋白的表达与肿瘤分化程度呈负相关。 4．EGFR与Ras蛋白表达呈正相关，提示联合检测两基因有助于大 肠癌的诊断及预后评估。 5．大肠癌中K．ras基因1 2密码子G—T和G—A突变是主要的突变 方式。12密码子的突变可能为Ras蛋白增多的原因。 关键词：结直肠肿瘤 表皮生长因子受体 原癌基因ra$免疫组织化学 2 Protein ofEGFR、Rasand mutationsof expression gene K．．rasincolorectalcarcinoma Mas