暴发性肝衰竭大肾小球毛细血管容积的变化.pdfVIP

·中文论著摘要· 暴发性肝衰竭大鼠肾小球毛细血管容积的变化 目的 暴发性肝衰竭(FHF)并发症多，病死率高，预后差，是严重危害人类健康的疾病． syndrome，HRS)是肝硬化或其他严重肝病时发生的一 肝肾综合征(hepatorenal 种预后极差的严重并发症，以肾功能衰竭、血流动力学改变和内源性血管活性物 质激活、肾动脉显著收缩导致肾小球滤过率降低为特征。那么暴发性肝衰竭大鼠 肾小球毛细血管容积是否发生相应改变呢?我们应用D．氨基半乳糖(D-GAIN)联 合脂多糖(LPS)构建暴发性肝衰竭(FHF)大鼠模型，为了排除血浆中其它血管 活性物质对血管舒缩活性的干扰，本实验用FITC(荧光素．异硫氰酸酯)标记的 菊粉，通过检测肾小球菊粉含量(GIS)前后变化的百分比，计算肾小球毛细血管 容积的变化。 材料与方法 l、材料 选取SPF级别雄性SD大鼠，体重220-a：209，实验前分笼饲养，室温23士3C， 每隔12h开灯照明，普通饲料，自由饮水，饲养一周后用于实验。 2、方法 (1)构建暴发性肝衰竭(FHF)模型，根据既往研究结果，选择 量，根据肝肾功能损害及肝细胞坏死情况，确定阻断时间点为建模后12h。 其中G／L组设置7只大鼠，其余各组均设置5只。 (3)测定各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)，尿素氮(BUN)，肌酐(Cr)， ．1(ET-1)；肝组织常规HE染色，光镜下观察肝细胞坏死情况及组织结构是否发 生改变。 (4)肝肾组织病理学检查，肝组织石蜡包埋固定后切片(4．09m)常规HE 染色，光镜下观察肝细胞坏死情况。电镜标本常规脱水包埋，半薄切片经甲苯胺 蓝染色后光镜下固定，醋酸铀及柠檬酸铅双重染色后，在JEOLJEM．1230型透射 电镜下观察肾组织超微结构并拍照。 (5)筛网法迅速分离各组大鼠的肾小球，收集到1．5ml的EP管中，最后定 容至1．0ml，用细胞计数板计数肾小球数目(计数方法：4000个肾小球应取浓缩 液体量=1600／Nx稀释倍数，其中N=计数板横槽上下肾小球数目之和／2)，以 水浴1009／min摇动30rain,等分成二管，其中一管加内皮素，另一管不加内皮素， 5009离心10s，取209l上清后，弃上清，吸净残余液体，向管底沉淀之。肾小球团 0．3％TritonX-100，重悬后溶解过夜，后应用荧光分光光度计分别检测 块中加500p1 每个样品上清及肾小球团块FITC标记菊粉的荧光值(FI)，激发波长为488nm， 算出GIS值，并计算每个肾小球收缩前后GIS变化的百分率。 (6)统计学处理：采用spssl7．0软件分析，数据均值士标准差(x士s)表示， 采用单因素方差分析，并进行均数两两比较，P0．05具有统计学意义。 睦里 ；日7一 ． 1、血清肝肾功能生物化学指标 对照组相比均有显著性差异(P0．05)，并且在12h时间点G／L组上述五项指标 分别与G组、L组相比较，均有显著性差异(P0．05)，从客观上排除了D-GaIN、 LPS药物本身对上述五项指标的影响。 2、肝肾组织病理学检查结果 肉眼观察D．GalH／LPS联合给药12h后肝脏呈酱紫色，充血肿胀，弥漫出血 2 点，切面有暗红色淤血或黄色乳糜状坏死物质溢出。光镜下肝细胞大片坏死，没 有肝细胞再生，纤维间隔塌陷，充填大量红细胞。电镜下观察。肾小球、近曲小管、 远曲小管结构均正常，提示造模成功。 结果 计学意义。 结论 l、D．GMH／LPS联合打击SD大鼠，成功构建F脏动物模型。 2、D．GMH／LPS联合打击后12h肝肾功能损害及肝细胞坏死最严重，是我们 选择的阻断时间点。 3、暴发性肝衰竭大鼠肾小球毛细血管容积明显降低。 关键词 乳糖(D．GalN)，脂多糖(LPS)，肾小球菊粉含量(GIS) 3