卵巢上皮性肿瘤皮素的表达及和ca125的相关性研究.pdf

中 文 摘 要 卵巢上皮性肿瘤间皮素的表达及与CAl25 的相关性研究 摘 要 目的:间皮素(mesothelin,MSLN)是由单克隆抗体CAK1 在间皮细胞、间皮瘤和卵巢癌中识别的抗原MMSLN的cDNA 编码69kDa多肤，糖基化后被蛋白酶水解为40kDa和31kDa 的 片 段 ， 40kDa 通 过 糖 基 磷 脂 酞 肌 醇 (glycosylphosphtidylinositol)与胞膜相连，应用高通量的基 因芯片技术发现MSLN在卵巢癌细胞有极高表达，31kDa为分 泌蛋白，脱落成可溶片段，在患者的血清中可以检测。近来 研究显示MSLN和CA125以特殊的方式结合，它们的表达 和功能可能有关联，二者在卵巢癌细胞膜和血清中的水平高 低的关系一可能与患者的临床期别、人体的荷瘤量和病情进展 有关，二者相互作用可能与卵巢癌细胞的脱落、与腹膜间皮 细胞特异性豁附、种植有关，最终导致腹腔广泛转移。最新 研究提示卵巢上皮性癌来源于卵巢表面上皮性的恶性转化， 本研究从基因和蛋白两个水平上，结合临床病理探讨MSLN 在正常卵巢皮质和卵巢上皮性肿瘤组织的表状况达及和 CA125蛋白表达的相关性研究。 方法:本研究标本取 自河北医科大学第四医院妇产科 2002年5月一2003年5月住院接受手术的患者或河北医科 大学第四医院病理科2002年 1月~2004年4月存档的石蜡 包埋组织。18例正常卵巢皮质，24例卵巢良性上皮性肿瘤， 其中9例浆液性囊腺瘤，15例赫液性囊腺瘤;107例卵巢上 中 文 摘 要 皮性癌，其中45例浆液性囊腺癌，16例赫液性囊腺癌，46 例宫内膜样癌。按照WHO要求进行病理分类。标本于术中 离体半小时内取材，立即置入液氮速冻，并保存于一80℃冰 箱备用或4%福尔马林固定，石蜡包埋。(1):半定量逆转录- 聚合酶链反应(RTPCR)方法检测MSLNmRNA的表达:从 组织标本中提取总RNA，并通过电泳和紫外线分光光度仪鉴 定 RNA 的完整性和纯度 。MSLN基 因的引物据 NCBI GenBank(B0003512)的cDNA文库序列为:MSLN正义引物 5}-AACGGCTACCTGGTCCTAG-3};反义引物5’-TTT ACTGAGCGCGAGTTCTC-3}。热循环条件为:37℃反转 录60分钟;940C5分钟灭活逆转录酶;94℃变性45秒，57C 退火45秒，72℃延伸45秒，35个循环后72℃延伸5分钟。 0-actin作为内参照。反应完毕离心后一20℃保存。最后对 RT-PCR扩增产物进行电泳分离，应用凝胶成像系统观察电 泳DNA条带，并使用凝胶成像分析系统软件对结果进行相对 定量分析。以mRNA指数作为表达参数，即MSLN指数二MSLN mRNA/0-actinmRNA。所有结果应用SPSS10.0版统计软件 分析处理，采用t检验，方差分析。以P0.05有统计学意 义。(2):免疫组织化学 (SP)法检测MSLN和CA125蛋白 的表达、定位及与临床病理间的关系:石蜡切片常规脱蜡至 水，3%过氧化氢室温孵育 15分钟，以去除内源性过氧化氢， 蒸馏水冲洗磷酸盐缓冲液浸泡 5分钟，构椽酸盐热修复20 分钟，磷酸盐缓冲液冲洗5分钟，共洗三遍。 10%正常山羊 血清封闭非特异抗原，加入小鼠抗人MSLN或CA125在37C 孵育60分钟，加入生物素标记的兔抗鼠IgG370C孵育10分 钟氧化氢加入1:100辣根过氧化物酶标记的链霉素，自来水 中 文 摘 要 停染苏木精复染，中性树胶封固。对照组用PBS代替一抗。 所有结果应用CS2000第九版统计软件分析处理，以P0.05 有统计学意义。 结果:(1):MSLN和CA125蛋白的表达及与临床病理 因素的相关性:分析正常卵巢皮质8例，良性卵巢_L皮肿瘤 18例，分析正常卵巢皮质8例，良险卵巢上皮肿瘤18例， 72例卵巢上皮性癌的MSLN和CA125蛋白在正常卵巢皮 质、良性卵巢上皮肿瘤组织及恶性卵巢上皮性肿瘤组织均有 不同程度的表达。MSLN和CA125蛋白表达在卵巢上皮性癌 组织显著高于卵巢良性上皮性肿瘤组织 ((P0.05),病理分 级