基因工程的基本操作工序概述.ppt

(1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRⅠ酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_____、_____、_____三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行_____。 (2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_____。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是_____，其合成的产物是_____。 (4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是___________________________________________________。 【解析】将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用Eco RI酶切，所产生的黏性末端相同，用DNA连接酶处理后，不同的片段随机结合，可形成3种不同的连接物，这些连接物可采用电泳、层析或超速离心等手段分离纯化，将这3种连接物导入受体菌后，可根据不同连接物所携带抗性基因的差异选择不同的培养基进行筛选。由图示和题目中提供的信息可知，同时应用Eco RI和Bam HI进行酶切可有效防止酶切后产生的末端发生任意连接。 答案：(1)目的基因—载体连接物 载体—载体连接物 目的基因—目的基因连接物 分离纯化 (2)载体—载体连接物 (3)启动子 mRNA (4)EcoRⅠ和BamHⅠ(只答一种酶不可) 11.α1-抗胰蛋白酶缺乏症是北美常见的一种单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡。利用基因工程技术将控制该酶合成的基因导入羊的受精卵，最终培育出能在乳腺细胞表达人α1-抗胰蛋白酶的转基因羊，从而更容易获得这种酶。 下列关于该过程的叙述中错误的是( ) A.载体上绿色荧光蛋白基因(GFP)的作用是便于筛选含有目的基因的受体细胞 B.将目的基因导入羊膀胱细胞中，将会更加容易得到α1-抗胰蛋白酶 C.培养出的转基因羊的所有细胞中都含有该目的基因，故该羊有性生殖产生的后代也都能产生α1-抗胰蛋白酶 D.目的基因与载体重组过程需要DNA连接酶的催化作用 【解析】选C。绿色荧光蛋白基因(GFP)的作用是作为标记基因，便于筛选含有目的基因的受体细胞，故A正确；诱导目的基因在羊膀胱细胞中表达可从羊尿液中获得相关产物，其优点是不受羊性别及发育状况等因素的限制，所以更容易获得相关物质，故B正确；有性生殖的后代会发生性状分离，可能有部分个体不能再产生α1-抗胰蛋白酶，故C项错误；目的基因与载体重组时要用到限制酶和DNA连接酶，故D正确。 12.在判断抗虫基因是否成功转入棉花基因组的方法中，属于分子检测的是(多选)( ) A.通过观察害虫吃棉叶是否死亡 B.检测目的基因片段与DNA探针能否形成杂交带 C.检测目的基因转录形成的mRNA与DNA探针能否形成杂交带 D.检测目的基因表达产物蛋白质能否与特定抗体形成杂交带 【解析】选B、C、D。A项属于个体生物学水平的鉴定，不是分子检测。B、C两项为分子检测，利用DNA分子杂交技术，观察目的基因及目的基因转录形成的mRNA能否与DNA探针进行杂交，形成杂交带；D项也为分子检测内容，利用抗原-抗体杂交的原理，检测基因表达产物能否与特定抗体形成杂交带。 13.苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。下图是转Bt毒素蛋白基因植物的培育过程示意图(ampr为抗氨苄青霉素基因)，据图回答下列问题。 (1)将图中①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反应管中有_____种DNA片段。 (2)图中②表示 HindⅢ与BamHⅠ酶切、DNA连接酶连接的过程，此过程可获得_____种重组质粒；如果换用BstⅠ与BamHⅠ酶切，目的基因与质粒连接后可获得_____种重组质粒。 (3)目的基因插入质粒后，不能影响质粒的_____。 (4)图中③的Ti质粒调控合成的vir蛋白，可以协助带有目的基因的T-DNA导入植物细胞，并防止植物细胞中_____对T-DNA的降解。 (5)已知转基因植物中毒素蛋白只与某些昆虫肠上皮细胞表面的特异性受体结合，使细胞膜穿孔，肠细胞裂解，昆虫死亡。而该毒素蛋白对人类的风险相对较小，原因是人类肠上皮细胞__________________。 (6)生产上常将上述转基因作物与非转基因作物混合播种，其目的是降低害虫种群中的_____基因频率的增长速率。 【解析】本题考查基因工程的相关知识。(1)若假设①DNA 可表示为 ,则由于上述两种酶形成的黏 性末端不一样，所以被两种不同的限制酶切割之后所形成的 片段有四种，即a、b、c、d。(2)同时被两种限制酶切