第章DNA复制要点.ppt

本章内容 DNA复制基本概念和基本特征 DNA复制的酶和蛋白质 DNA复制的过程 DNA的损伤与修复 DNA的突变 单核苷酸多态性(SNP) DNA复制的一般特征 以原来的DNA两条链作为模板，四种dNTP为前体，还需要Mg2＋ 作为模板的DNA需要解链 半保留复制 需要引物——主要是RNA 复制的方向始终是5′→3′ 具有固定的起点 多为双向复制，少数为单向复制 半不连续性 具有高度的忠实性和进行性 一、半保留复制的实验依据和意义 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全重新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 三、双向复制 多数原核和真核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 DNA复制起始区的特征 由多个短的重复序列组成； 能够被多亚基的复制起始区结合蛋白识别； 通常富含AT碱基对，这有利于DNA复制起动时的解链，因为AT碱基对含有的氢键数目低于GC碱基对。 二、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 四、DNA引发酶(引物酶) 是一种专门用来起动或引发DNA合成的酶，其实质是一种RNA聚合酶,能合成RNA引物. 由于DNA聚合酶本身不能起动多聚物的合成，只能延伸已经被起动的多聚物，因此，引发酶是DNA复制所必需的。 因为DNA复制的半不连续性，故引发酶在前导链上只需引发一次，而在后随链上则需用引发多次。 五、切除引物的酶 RNA引物只是用来起动DNA的复制，它最终并不存在于被复制的DNA分子之中，迟早要被除去，实际上，细胞内有专门的酶负责切除RNA引物。 原核细胞内切除RNA的酶是DNA聚合酶I或核糖核酸酶H （RNase H) 。 真核细胞负责切除RNA引物的酶是RNaseHⅠ/FEN1或FEN1/Dna2。 一、以大肠杆菌为代表的“θ-复制”系统 DNA复制的起始——起始于OriC的识别，结束于引发体的形成 DNA复制的延伸 （1）前导链合成 （2）后随链合成 DNA复制的终止和子代DNA的分离 二、真核细胞的DNA复制 真核细胞的DNA复制在很多方面与原核细胞极为相似，但也有几点不同于原核细胞的地方： （1）需要解决核小体和染色质结构对DNA复制构成的障碍； （2）复制叉移动的速度远低于原核细胞； （3）具有多个复制子，这可以弥补复制叉移动速度低对整个DNA复制速度的制约； （4）冈崎片段的长度小于原核细胞； （5）复制被限制在细胞周期的S期，并受到严格的调控； （6）在第一轮复制结束之前不可能进行第二轮复制，而原核细胞在第一轮复制还没有结束的时候就可以进行第二轮复制； （7）需要端聚酶解决染色体DNA末端复制问题。 ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 ? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 DNA复制的高度忠实性 （1）四种dNTPs浓度的平衡 （2）DNA聚合酶的高度选择性 [遵守严格的碱基配对规律] （3）DNA聚合酶的自我校对 （4）使用RNA作为引物 （5）错配修复 单核苷酸多态性 SNP (single nucleotide polymorphism) 指在基因组水平上有单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。 本章小结 DNA复制一般特征（基本规律） 参与复制的酶和蛋白质 原核生物DNA复制过程 真核生物DNA复制过程的主要特点（与原核相比） 端粒和端粒酶 DNA的损伤:UV,化学 DNA修复:光活化修复,切除修复 DNA突变 SNP 原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。 ori ter E.coli 82 32 ori ter SV40 50 0 （三）复制的终止 哺乳动物的细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M 真核生物的DNA复制 （一）复