电离辐射在皮肤成纤维细胞WS1中诱导旁效应的应答机制的分析.pdf

电离辐射在皮肤成纤维细胞WS1 中诱导旁效应的应答机制研究 中文摘要 中文摘要 目的： 电离辐射诱导的旁效应指的是未受照射细胞在接受照射细胞传递的信号后产 生的生物学变化。包括旁效应在内的非标靶效应改变了放射生物学的传统理论而 成为广为接受的新教义。旁效应的发生在低剂量辐射健康风险的评估、放疗的疗 效及对正常组织的损伤等方面可能具有重要作用，因此已成为放射生物学领域的 一个研究热点。目前关于旁效应的研究主要集中在其发生的分子机制以及对机体 造成的影响等方面。从旁效应发生的过程来看，它包括信号细胞受照后启动关键 的信号通路，然后释放旁效应信号，最后受体细胞接受旁效应信号产 物学变 化。本研究的主要目的是从受体细胞的角度来研究旁效应发生的分子机制。具体 说来，首先要验证X射线是否可以在人胚胎皮肤成纤维细胞WS1 中诱导经培养液 介导的旁效应现象；然后进一步探究受α粒子照射的HaCat角质细胞与未受照射的 WS1细胞共培养后，WS1细胞是否会发生旁效应，如果发生那么WS1细胞的应 答机制又是什么，最后用HaCat细胞和WS1细胞简单模拟构建人皮肤组织模型， 为在半体内进一步深入研究电离辐射旁效应奠定基础。 方法： 本研究采用条件培养液转移和共培养两种方法研究培养液介导的电离辐射旁 效应。辐射方式包括X射线和α粒子。在第一部分中，以微核形成、DNA损伤（53BP1 foci miR-21 X WS1 ）、细胞凋亡、增殖、活性氧水平和 等指标确证 射线在 细胞中 诱导经条件培养液介导的旁效应；另用ELISA法定量检测了条件培养液中TGF-β1 含量的变化；第二部分主要是采用克隆形成实验和53BP1foci免疫荧光实验对本 实验室自行设计的用于细胞生物学实验的新型α粒子照射装置进行验证。在第三部 分中，以ROS水平和53BP1foci为指标检测与受α粒子照射的角质细胞HaCat共 培养的人皮肤成纤维细胞WS1发生的旁效应。更重要的是，采用细胞转染改变 WS1细胞miR-21的表达水平或通过外源性增加细胞SOD2的水平来细致地研究了 旁效应细胞中的miR-21和SOD2在旁效应发生中的重要作用。第四部分，以鼠尾 胶原蛋白为基质，将人胚胎皮肤成纤维细胞WS1和人永生化角质细胞HaCat进行 I 中文摘要 电离辐射在皮肤成纤维细胞WS1 中诱导旁效应的应答机制研究 立体结构培养，简单模拟人体皮肤组织的构成，并通过HE和免疫组化染色验证三 维组织的成功构建。 结果： 1.X WS1 Ctr 射线可在 细胞中诱导经培养液介导的旁效应。与新鲜培养液（ ） 和未受照射条件培养液（SCM）对照组相比较，用1GyX射线照射后3小时的 WS1 3hRCM WS1 30 细胞条件培养液（ ）处理未受照射的 细胞 分钟后，旁效应 细胞中ROS水平可升高11%；3hRCM处理旁效应细胞1小时后，53BP1foci 阳 性细胞率增加了38%；3hRCM处理旁效应细胞3小时后，旁效应细胞中miR-21 1.38 3hRCM 24 的表达水平增加了 倍； 处理旁效应细胞 小时后，微核形成率增加 44% 3h SCM 3hRCM TGF-β1 了 ，凋亡增加近一倍。此外还发现，与 相比，