乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体pEGFP-C1-JEV的构建及在BHK-21细胞中表达.pdfVIP

．病毒学． 乙型脑炎病毒E蛋白基因真核表达载体 pEGFP—C1一JEV的构建及在BHK一21 细胞中表达 冯若飞 张晓媛 林贵鸿 李明生 乔自林凡静静 李向茸 张海霞 樊得英马忠仁 【摘要】 目的构建乙脑病毒E蛋白基因片段的真核表达载体pEGFP—C1一JEV，旨在研究E蛋 白基因在BHK-21细胞中的瞬时表达情况，为进一步深入研究提供基础资料。方法通过RT．PCR扩 增目的基因，酶切并重组后成功构建绿色荧光蛋白标记的pEGFP—C1一JEV重组表达载体，利用脂质体 介导将重组质粒转染BHK-21细胞，观察绿色荧光标记蛋白表达情况，同时提取细胞RNA，检查目的 基因转录表达情况，并利用免疫组化和Westernblot法检测目的基因表达情况、表达蛋白在细胞中的 定位以及表达蛋白抗原性。结果重组质粒pEGFP-C1-JEV构建成功，转染至BHK-21细胞中，绿色 荧光标记蛋白正常表达，表达率较高，RT—PCR表明目的基因在BHK-21正常转录并表达，表达蛋白主 要分布在BHK-21细胞的胞质和包膜中，且能与豚鼠抗JEV抗体特异性结合。结论pEGFP．C1一JEV 质粒在BHK-21细胞中正常表达，且对细胞生长和形态不产生影响，真核表达抗原具有良好的抗原 性，本研究可为进一步探讨乙型脑炎E蛋白基因体外真核表达及其功能和应用的研究提供基础 资料。 【关键词】乙型脑炎病毒；E蛋白基因；绿色荧光蛋白；真核表达 of vectorofE from and fu-- Construction JEV pEGFP—C1-JEVeukaryotic gene expression expression in sion moleculeBHK-21cellsFENG protein Ruo-／ei+，ZHANGXiao一”llxTtn，LIN Ming— Gui—hong，LI Hai-xia，FAN sheng，QIAO De—ring，MA Zi—lin，FAN如w手昭，LIXiang—rong，ZHANG Zhong—Ten．+Key Ethnic For State Commission．Northwest Laboratoryof of Affairs University BioengineeringBioteehnology Nationalities，Lanzhou730030，China author：FENG Corresponding Ruo手i，Email：筋e鲈@126．com Toresearchthemolecularcharacteristicsandtransient Objective 【Abstract】 biology expression inBHK一21c