含前S的乙肝病毒表面抗原的纯化与分析.pdfVIP

第47卷第12期 湖北农业科学 V01．47No．12 Hubei Sciences 2008年12月 A—cultural Dec．，2008 含前S的乙肝病毒表面抗原的纯化与分析 王德彬1．颜 垡2 1．中南民族大学生命科学学院／生物技术国家民委重点实验室，武汉430074；2．武汉纽斯特生物技术有限公司，武汉430074 摘要：将获得的能稳定表达舍前S的乙肝病毒表面抗原的重组CHO细胞进行培养．并收取培养液上清． 拟分析并纯化重组CH0细胞表达的蛋白。利用高效液相层析试验，分析表达产物．表明重组细胞表达产 物具有乙肝表面抗原——大蛋白 【s 的生化特性。并通过沉淀离心和sephalo鸵Cl广_4B柱层析进行了 初步纯化。结果表明。CIO细胞株表达的蛋白与预期设计的相似．并获得初步的纯化。 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原；高效液相层析；纯化；免疫胶乳浊度测定 中图分类号：$816 文献标识码：A 文章编号：0439—8114 2008 12—1383— 4 and of BVirusSurface Pre-S Analyzing PurifyingHepatitis AntigenCarrying WANG Huaz De-binl，YAN of EthnicAffairs for ofLife Lal oratotyState CommissionBiological Science，South-Centralfor 1．Key Technology，College University Nationalities，WuMn 430074，China；2．NeweastBiotechnology，lnc，Wuhan430074，China Abstrset：Toand the inrecombinantCHO，the ofrecombinantCHOwas analyzepurifyexpressionprotein expression analyzed withHPLC．With CL—4B couldbe ofthe in Sepharosechromatograph．theexpression purified．Characterexpressedprotein recombinantCHOWag tothatofdesigned itcouldbe equal protein，and purified． Keywords：HBsAg；HPLC；purify；immunolatexturbidimetry 本实验室采用双质粒共转染CHO细胞．应用 复星长征科学有限公司出品。 双选择条件筛选，获得稳定表达的重组细胞株C10， 4 酶免测定PreS2一Ag试剂盒：北京医科大学 通过对该重组细胞株CIO表达产物的研究．确认其 肝病研究所北京肝炎试剂研制中心出品。 生化和免疫特性，并建立了合适的纯化方法。 1。2粗提液表达水平的测估 1材料与方法 白 倍比稀释。同时取重组CH0C10细胞株的上清 1．1 材料 粗提液，EI。ISA法测定相应的OD值．计算样品测估 11表达大蛋白乙肝表面抗原的CHO细胞CIO的抗原表达量。 株：本实验室获得的表达大蛋白乙肝表面抗原的 2 免疫沉淀法抗原测定：抗体缓冲液于37℃恒 CHO细胞CIO株。收集细胞培养上清液20mL， 温．加入一定量的人乙型肝炎免疫球蛋白．混匀过 2000 r·min一4。C离心20min，加入硫酸铵晶体．过 滤．每管取2mL配制的抗体液，分别于每管加入标 程中缓慢地摇动使之溶解。至硫酸铵终浓度26％． 准乙肝表面抗原50～5“g和一定量的待测样品， 于4℃保存16h。3500r·rain一40C离心20rain．沉淀 37℃恒温水浴lh，在波长340tim处比色．计算样品 用lmL 7．4PBS溶孵【¨。 测估的抗原表达量。 pH 2 乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒：上海实 1．3 ELISA法测定表达产物和提取物的S、preSl 业科华生物技术公司出品。 和preS2 3 乙肝病毒PreSl抗原酶免检测试剂盒：上海 ELISA法说 分别按照测定S、preSl和preS2 收稿日期：2008—10—25 颜华，研究员，博士． 电话 1座机电话号码77 电子信箱 yanhual026a@yahoo．130111．en。 万方数据 1384 湖 北 农 业 科 学 2008正 明书操作。 O --0．2 1．4蛋白含量检测 Lowry法l 凸-0．4 L-I 标准蛋白：精确吸取标准蛋白液 100斗g·m 靶： 0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．OmL分别加入试管中，加蒸馏 一l 水至lm