发育早期铅暴露食蟹猴阿尔茨海默病样作用及其对表观遗传修饰的影响.pdf

摘要 摘 要 disease，AD)是一种与年龄高度相关、进行性发 阿尔茨海默病(Alzheimer’S 展的原发性神经退行性疾病。尽管AD的发病机制至今不明，但众多研究表明， p一淀粉样蛋l兰l(Amyloid13-protein，Ap)是各种原因诱发AD的共同通路，是AD 发生发展的关键因素。因此，围绕AD展开的对AD发生发展进程中的各种影响 因素及其调节机制的探讨是当今该领域研究的热点。 近年来，环境中低剂量铅(Lea也Pb)暴露对人群健康的影响已成为重要的 公共卫生问题。发育期的中枢神经系统对铅的毒性尤为敏感，可导致儿童智力 损害以及认知和注意力等神经功能障碍，而个体认知功能下降与AD的病理改变 存在一定的相关性。基于成人疾病的胚胎起源假说，有学者提出AD存在早期起 源的可能性，结合铅在神经系统发育中不可忽视的毒性效应，本研究认为铅可 能参与了个体AD样变进程。 表观遗传(Epigenetics)是针对基因与环境相互作用所致基因表达变化的一 个重要的适应机制。多数学者认为AD是一种由遗传因素和环境因素共同作用的 复杂的异质性疾病，已有证据提示表观遗传修饰异常可能是迟发型AD发病的重 要机制之一，因此本研究认为环境铅可能通过对表观遗传修饰的影响在AD的发 生发展中发挥重要作用。 为验证上述假设，·本研究运用食蟹猴队列研究并结合体外实验，探讨铅在 AD样变进程中的作用及可能的表观遗传修饰效应，从而为进行AD的病因及发 病机制研究提供科学依据。 目的 1 基于发育早期铅暴露食蟹猴模型，探讨铅暴露、表观遗传修饰在AD样进程 中可能致病机制。 2通过构建铅暴露体外模型，探讨铅对SH．SY5Y细胞可能的AD样作用。评估 铅暴露对SH．SY5Y细胞组蛋白乙酰化及甲基化修饰的影响。 摘要 材料与方法 1研究对象 1．1动物模型：将刚出生的10只雌性食蟹猴随机分为两组进行队列研究。铅暴 露组(23PbE)：从幼猴出生之日至400日龄每天饮用含醋酸铅的配方奶粉，剂 量为1．5mg·kg以·d～。对照组(23CT)：从幼猴出生之日至400日龄每天饮用 无铅配方奶粉。两组动物断乳后常规无铅饮食饲养至23岁，分批次实施安 乐死。另选择雌性食蟹猴8只，从出生之日至400日龄每天给予无铅配方奶 粉饮食，自401日龄起断乳并开始常规无铅饮食饲养，于各取样节点(3～6 岁或12岁)分批次对实验动物实施安乐死。分离双侧大脑皮层备用。 1．2细胞株：选用人源神经母细胞瘤细胞SH．SY5Y细胞株作为研究对象。经 RA分化后，分别给予终浓度为5州～100rtM的醋酸铅染毒。 2方法 2．1 采用Westemblot及免疫荧光分析技术检测各实验组AD相关蛋白、DNA甲 基化修饰、组蛋白乙酰化及甲基化修饰相关蛋白的表达水平。通过微阵列分 析技术检测神经生物相关基因的表达谱。 法检测醋酸铅暴露对Apl舶表达的影响，并对NEP活性进行荧光测定。 3 统计分析 使用SPSSl2．0统计软件包进行实验数据的统计分析：两组数据比较采用两独 立样本t检验，多样本均数之间的比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD 法，以均数4-标准误表示。两组样本间相关性比较采用Pearson相关分析。检验水 准为a=0．05。 摘要 结果 1 表达的影响 随着年龄的增长，食蟹猴皮层组织qhAIBPP蛋白水平逐渐升高。正常23岁龄 23CT组(P0．05)。随着年龄的增长，食蟹猴大脑皮层组织中NEP蛋白的表达呈现 先增高后降低的趋势。正常12岁年龄组NEP蛋白的表达明显高于3-6岁龄组及23 岁龄组妒0．01)。此外，23PbE组NEP蛋白表达水平低于23CT组∽0．o 1)。 随着年龄的增长，食蟹猴皮层组织中DNMTI蛋白的表达逐渐下降。正常23 2 发育早期铅暴露对食蟹猴神经生物相关基因表达的影响 在筛检的588个与神经生物学相关基因中，发现16个基因的表达明显低于对 照组，仅6个基因在铅暴露组的表达明显高于对照组。