农经(兽药)与白质相互作用的光谱法研究及其分析测定.pdf

摘要 本论文对农药(兽药)小分子的定量测定分析进行研究，应用荧光光谱法 以及与化学计量学结合、共振光散射技术等多种方法应用于实际样品中几种农 药(兽药)残留的分析；同时应用荧光光谱法、紫Cb-可见分光光度法、圆二色 谱法等现代分析技术对农药(兽药)小分子与蛋白质在生理pH值条件下的相互 作用进行了研究。为这些有害化合物检测提供新方法，同时从分子水平上了解 有害化合物质在体内的储存、转运提供了理论依据。主要内容如下： 1．速灭威能与牛血清白蛋白(BSA)发生相互作用产生荧光增强效应，测 定了不同温度下的结合常数；应用荧光偏振技术分析了药物与蛋白质的作用情 况；利用范德霍夫方程计算了反应的热力学参数，确定了速灭威-BSA体系的主 要作用力为氢键和范德华力；同步荧光光谱、三维荧光图谱以及荧光偏振实验 表明，速灭威的加入使BSA的二级结构改变； 在pH am时， 加入一定量的6一环糊精，3种农药的荧光强度均有不同程度的增加，且与农药 的浓度呈良好的线性关系，速灭威、残杀威和呋喃丹单组分的测量线性范围分 别为0．2-2．0、0．02-0．38和0．04--0．56pg·mL-1：检出限分别为0．083、0．015和0．020 等多种化学计量学校正模型对3种农药的混合体系合成样品进行光谱解析并进 行比较。建立了一种同时检测残杀威、速灭威和呋喃丹3种能够产生较强的内 源荧光但光谱严重重叠的氨基甲酸酯类农药的新方法。结果表明，PLS有较好的 预报能力对3种农药含量的测定，采用该模型对一些实际食品样品进行分析， 结果满意。 2．采用荧光法研究抗蚜威与溶菌酶(LYS)的相互作用，得出抗蚜威以动 态猝灭方式猝灭溶菌酶的内源荧光；非辐射能量转移也是导致抗蚜威对溶菌酶 内源荧光的猝灭的原因之一；由热力学参数推断出疏水作用力是抗蚜威与LYS 之间的主要作用力；同步及三维荧光光谱显示抗蚜威对LYS的构象产生影响： 研究发现抗蚜威在pH7．0的-R缓冲介质中，十六烷基三甲基溴化铵 (CTMAB)于九x‰=252／397姗处能敏化抗蚜威的荧光，且荧光强度与抗蚜 威的浓度有良好的线性关系，抗蚜威浓度线性范围为0．006-0．14 tag·mL-1，检出 摘要 限为5．7ng·mL-‘。据此建立了一种灵敏、简便的荧光光度法测定食品中抗蚜威 残留量。将该法用于测定实际食品样品中的抗蚜威残留量，结果满意。 3．采用荧光、紫外可见光谱法以及圆二色谱等方法研究了在生理pH条件下 呋喃唑酮与BSA的结合作用。荧光和紫外光谱的结果表明呋哺唑酮对BSA的荧 光的猝灭作用属于静态猝灭。求得了不同温度下呋喃唑酮与BSA作用的结合位 点数、结合常数及反应热力学参数，并推测了它们之间主要的相互作用力为氢 键和范德华力。根据F6rster非辐射能量转移理论，求出呋喃唑酮在BSA的结合 位置与色氨酸残基间的距离为3．51 nlil。同步荧光光谱法、三维等高线光谱法以 及圆二色谱方法显示呋喃唑酮的加入对BSA的构象产生影响。呋喃唑酮与结合 I、site 位点探针华法林、布洛芬和洋地黄毒苷(site II和siteIII)的竞争实验表 明呋哺唑酮结合在BSA疏水空腔的siteI位点上： 在pH=7．00的．R缓冲溶液介质中，吖啶橙本身发较强荧光，但是呋喃唑酮 的加入猝灭了吖啶橙(AO)的荧光，且猝灭的荧光强度△F与呋喃唑酮的浓度 在0．06--0．60 g,g·mL-。范围内存在线性关系，其检出限(S／N=3)为0．0521 P,g·mL-l。 该方法用于鸡蛋、基围虾、猪肾中的测定，测得回收率在83．9-125．0％之间， RSD在O．7-4．8％之间。 4．采用荧光光谱等方法对甲氰菊酯一人血清白蛋白(HSA)之间的各种作用 信息进行了研究。结果表明：甲氰菊酯以动态猝灭的方式猝灭HSA的内源荧光； 根据结合反应的热力学参数推断出甲氰菊酯与HSA之间的作用过程是一个熵增 加、Gibbs自由