建立离体兔眼试方法及其替代Draize试验的应用研究.pdf

中山大学硕士学位论义 建寺离体兔眼试验方法及其替代DraiTe试验的应用研究 建立离体兔眼试验方法及其替代Draize试验的 应用研究· 专业：卫生毒理学 硕士生：郭翔 指导教师：杨杏芬教授 中山大学公共卫生学院 广东省疾病预防控制中心(广东省卫生检验中心) 中文摘要 眼刺激是指外源化学物接触眼表面后使眼产生的可逆件炎症反应。一卜世纪 40年代Draize等刨立了家兔眼刺激性试验(Draizc test)，此试验一直应用于化学 物的眼刺激性检测。几十年来，Draize试验在化学物的眼刺激性毒理学安全性评 价，保护人群健康方面做出了巨大贡献。近年来，随着科学技术的进步，社会动 观性强，实验室问检测结果重复性差和造成动物较大痛苦等缺点，Draize试验面 临着越来越多的批评和谴责。为此欧盟(EuropeanUnion，EU)、美国、日本及其 他国家和地区开展了有关眼刺激性试验替代方法的研究与评价工作，2003年欧 年起在欧盟范围内禁止使用动物进行化妆品毒性和过敏试验，2013年禁止使用 动物进行化妆品及原料的毒理学安全性评价，逐步不允许成员国从外国进口和销 售进行过动物试验的化妆品。自二十世纪八十年代国外学者开始探索用离体试验 方法替代整体动物试验以来，眼刺激性体外替代方法的研究取得了较大进展，建 立了离体器官模型、绒毛膜尿囊膜试验、体外细胞毒性与功能试验、体外组织重 组模型等多种体外方法，在此基础上部分研究者还推荐通过合适的统计学方法和 ‘本课题受卫生公益性行_k科研专项经费(200802080)资助 l 中山J：学硕士学倚论史 建市离体兔眼试验方法及其替代Draize试验的应用研究 检测策略以增强它们应Ⅲ的有效性。我国有研究者对眼刺激试验的替代方法进行 了初步的探索，先后建立了鸡胚绒毛膜尿囊膜试验、绒毛膜尿囊膜．台盼蓝染色 试验、3T3成纤维细胞中性红摄取试验、荧光素漏出试验以及红细胞溶血试验等 眼刺激试验的替代方法，但研究发现各种方法均有其适用范围和局限性，迄今在 应用上尚不能直接使用单一方法替代整体动物试验，迫切需要针对多个观察终点 建立更多的替代试验方法，进而建立综合检测策略。而我国在此方面与国外相比 差距仍较大，为了加速我国同因际接轨的步伐，使我国化妆品出口能早日打破贸 易技术壁垒，也使我国对进U化妆品的毒理学安全性评价技术与国际通用方法体 系对接，很有必要建立更多适合我国国情的眼刺激性试验替代方法，以期将多种 方法有机组合、优势互补、最终构建检测策略，为眼刺激性体外替代方法应用于 化妆品及其他化学物(工业化学品、农药和消杀产品等)的毒理学安全性评价工 作提供科学依据。 研究目的 rabbit 1．通过探索离体兔眼(isolatedeye，IRE)刺激性试验的试验条件和研制 “离体眼球表面灌流系统”，建立及评价IRE试验方法。 2．应用IRE试验和传统的Draize试验对26种参照化学物和26种化妆品的眼刺 激性进行捡测，评价分级结果的相关性和一致性、IRE试验的可靠性以及IRE 试验对不同刺激性受试物的预测能力。 材料与方法 1．受试物 26种参照化学物(均为化妆品原料)和26种洗发护发类、染发类、烫发类 和洗面奶类化妆品。 2．传统的动物眼刺激性试验 参照我国卫生部《化妆品卫生规范》(2007年版)，选用健康成年白色新西 兰家兔进行传统的整体动物眼刺激性／腐蚀性试验，即Draize试验。 H 中山大学硕士学付论文 缝市离体兔毗试验方法及其替代Draize试验的应用研究 3．离体眼球表面灌流系统的研制及功能评价 在文献报道基础上，应用仿生学原理，结合本实验室实际情况，自行设计制 作离体眼球表面灌流系统，从而