抗软海绵酸单克抗体杂交瘤细胞株的构建.pdfVIP

审交攘簧 嚣 黎 零{}麓B漤嚣缨德袈交瘙技术建立分泌抗软海绵羧≤Okadaic Acid，OA)单宽隧抗体(MonoclonalAntibodies，McAb)的杂交瘸缅 您掾，炎下～步太爨篱餐撬OA鹣MeAb程建立测定OA懿酶联免 Immunosorbent 疫吸附试验(Enzyme—Linked Assay，ELISA)梭测方 法抒下基础。 方 法 f 、：l。抗熏麓备 Serum 首先利用碳化=照胺法将OA、牛媳清白蟹白(Bovine Carbodiimide Ethyl-3一(3-dimethyhminopropyl)Hydrochloride， sulfosuccinimide，Sulfo一 EDC)、N一羟基璜蒸貔璃懿翌胺(N—hydroxy 鞭HS)按I：3：l：t的比铡混合予‘毒℃的磷酸盐缓冲溶液(Phosphate Buffered Saline，PBS，pH7．4)中，离心辫收集抗原OA．BSA翻OA— OVA，分剿耀予动物免痰耧抗簿梭溅。 2。劫物免疫及血清中抗OA抗体檎潮 淡OA-BSA秀免疫蒙，免疫掰哭6-8震龄酶雄愁BALB／e小 鼠。首次免疫取80txl OA—BSA与等鬣完全槲氏佐剂(Complete Freund’s Adjuvant，CFA)瀵篙，藏T注射。在魏羼骜免疫孛嫠嚣等 Freund’s 蠛的不完全福氏住剂(IncompleteAdjuvant，IFA)，第4周 驳200}西OA-BSA皮下潦籍受疫，筹7感敬翼撵戆量经壤躔注瓣， OA．BSA的 第9周腹腔注射160一OA—BSA。两周后，取160HI PBS溶液经菠腔漤瓣露势翔强免疫，3关惹进褥缨整融会。 加强免疫前，以0AwOVA作为检测抗原用ELISA测定血清中 抗OA的抗体。 3。缨憝融合与选撵培养 将免疫后的小鼠牌淋巴细胞与骨髓瘤细胞P3X63一Ag．8．653 glycol，PEG)的作殿下进行融合，融合后 在聚乙二醇(Polyethylene 培养液进行选择培养。 毒．杂交瘩细胞豹筛选与巍隆 以OA—OVA为抗原，用EMSA测定培养上涛中扰OA的揽体， Dilu， 将抗簿耀牲缨脆魏鳃杂交瘤缨施按照有限稀释法(Limiting tion Method)进行克隆，再用ELISA检测培养上清中分泌抗OA的 McAb，赢裂瑟礴缀骢魏麓培养上溥均为器睦舅正。 5．杂交瘸细胞的扩大培养与冻存 将撬俸瓣接较强童生长氮睁鳇杂交瘗缨拣继续扩夫墙莽，姿 细胞达到一定数量后将细胞冻存起来。 6。统计方法 小鼠血清巾抗OA抗体的测定结果用方差分析进行统计。 结 果 I。撬嚣翡麟备 用碳化二_溉胺偶联法成功地将微爨半抗／g OA制成了完念抗 藤OA—BSA蠹OA—OVA，著将OA—BSA捧秀免疫蹑免疫动豹，将 OA-OVA作为检测用抗原。 2。受疫效皋 用抗原OA”BSA免疫两只BALB／c小鼠，经5次小剂量11周 免疫后，NNA,飘50倍鞭200傣稀释斑溥串均产生了挽0A的撬 体。 3．细胞融合与杂交瘤缨瓞筛选 ·2· 绥臆惑