沙丁胺醇的酶联疫吸附检测方法研究.pdfVIP

摘要 本文从硫酸沙丁胺醇出发制备半抗原沙丁胺醇丁二酸衍生物，用混合酸酐法 将半抗原与载体蛋白．钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)．偶联作为免疫抗原SAL．KLH进 行动物免疫；与辣根过氧化物酶(HI冲)偶联得酶标抗原SAL．HI冲，作为直接 竞争酶联免疫的酶标记物；采用碳二亚胺法合成SAL．0vA，作为间接竞争的包 被抗原。 通过特定的免疫程序，免疫同本大耳白兔，获得了亲合性很高的抗沙丁胺醇 的抗血清，经免疫亲和层析法纯化后获得多克隆抗体，建立间接竞争酶联免疫检 测方法。结果表明，此方法具有较高的灵敏度，IC50为1．7n∥mL，检出限(ICl5) 为0．09 n∥mL；交叉反映表明，抗体与克伦特罗的交叉反应为32．7％，与莱克多 巴胺、多巴酚丁胺、苯氧丙酚胺等均无交叉反应，说明抗体特异性较高。选择猪 瘦肉进行基质影响消除的研究，结果表明，当沙丁胺醇浓度在较高水平时，基质 曲线与标准曲线重合较好，当沙丁胺醇浓度在较低水平时，基质曲线与标准曲线 不能重合，基质曲线的实验点与标准曲线的实验点上下浮动较大。在样品中添加 三个水平的沙丁胺醇浓度，回收率达70％以上，为沙丁胺醇快速检测试剂盒的研 制奠定了物质基础。 为开发快速检测试剂盒，论文进一步验证了抗体和酶标抗原稳定性及贮存条 件。研究表明，抗体和酶标在4℃条件下储存半年以上而不影响检测性能，有利 于沙丁胺醇试剂盒的推广和应用，从而实现对沙丁胺醇的有效监控。 关键词：沙丁胺醇；p．兴奋剂：多抗；酶联免疫吸附分析 ABSTRACT salbut锄ol The succinatederivativew弱 行omsalbut锄ol hapten prepared was t0KLHforuseasme sulphate．Thehaptencoupled immunogenSAL．KLH，and toHRPfor吣e勰thetracerwithmetllodofmixed coupled enzyme acid柚hydride． The SAL tothe OVAwithmethodofcarbodiimidet0be h印ten w嬲coupledprotein forindirect ELISA． used弱coatingconjugate competitive The觚tisemm obtained疳omrabbitimmunised SAL．KLHsho、Ⅳed Japanbig by t0SAL．A indirect immullosorbent highamnity r印id competitiveer亿yme．1im(ed a assay(ELISA)procedureemployingpolyclonal antibodypurifiedbyiI砌unity the antisemm chromatography舶m showed a衔nity w嬲established．The锄tibody in of1．7 the