独一味对兔骨关炎模型关节软骨影响的实验研究.pdf

中文摘要 目的 探讨藏药独一味对兔KOA模型软骨退变的保护或治疗机 制，为临床独一味防治骨关节炎的推广应用提供理论支持。 方法 将4o只新西兰大白兔随机编号，分为五组，即，(A)空 白对照组、(B)模型对照组、(C)小剂量组治疗组、(D)中剂量组治 疗组、(”大剂量组治疗组，每组8只。A组作为空白对照组，行模 拟手术。B、C、D、E组按Hulth方法，制造兔膝关节骨关节炎模型。 术后1周开始全部实验动物每天驱赶行走30min，于造模1周后开 始灌胃，各治疗组给药剂量根据Meeh-Rubner公式计算，将按体表面 积折算的临床常用量等效剂量，溶于10mL蒸馏水中，独一味小剂量 治疗组、中剂量治疗组和大剂量治疗组分别灌胃给予独一味胶囊60mg 对照组于同一时间点给予等量生理盐水灌胃。治疗6周，末次给药后 禁食12h。处死动物。再用组织学、免疫组化、RT-PCR学等技术对 兔KOA模型关节软骨、关节液等部位进行检测和评估。 切开实验侧兔膝关节，对兔膝关节关节软骨行大体观察并参照文 献标准进行评分，比较各组间的差异；将关节软骨制作成普通光学显 微镜切片进行观察，并按照Mankin’s关节软骨组织学评分系统进行 评分，比较各组间的差异；制作透射电子显微镜切片，观察其超微病 理变化。 D、NO的含 在切开膝关节之前抽取关节液，检测关节液中IL-1 量变化，比较各组间的差异； 3， 应用RT-PCR技术检测药物治疗后，关节软骨ⅢP-3，ⅢP一1 TIMP-ImRNA表达的变化，比较各组间的差异； 用免疫组化法分别测量关节软骨组织GAG含量、Ⅱ型胶原阳性染 色面积的变化，并比较各组间的差异； 结果给药前后体重变化：与给药前动物体重相比较，各剂量 治疗组在实验结束时体重均有不同程度的增加，但无统计学差异(均 为P0．05)。关节活动度：实验动物关节被动活动度测定结果显示， 实验6周时，模型对照组与小剂量治疗组相比，P0．05。各治疗组关 节活动度均有不同程度的恢复，独一味中剂量、大剂量治疗组恢复程 度尤为明显(P0．01)。 大体观察，中、大剂量治疗组与模型对照组比较，软骨磨损、退 变程度明显减轻(P0．01)，光镜下观察，治疗组与模型对照组比较， Mankin’s评分明显降低，小剂量治疗组与模型对照组比较，P0．05； 中剂量、大剂量治疗组与模型对照组比较，P0．01；电镜观察发现， 药物治疗后中、大剂量治疗组关节软骨细胞的形态、结构、排列等均 优于模型对照组。 经不同剂量独一味治疗后，各组关节液中的NO、IL-16含量均 值相对于模型对照组有所降低，各治疗组间进行比较，中、大剂量治 疗组关节液中NO、IL-1D含量与模型对照组比较明显降低，比较有 显著性差异(P0．01)。小剂量治疗组与模型对照组比较，经检验，P D含量进 0．05；提示随着独一味剂量的增大，关节液中NO、IL一1 一步降低。 治疗后，中、大剂量治疗组与模型对照组比较，中、大剂量治疗 组MMP-3，埘P一1 3的mRNA表达较低、而TIMP-1的mRNA表达较高； 3的mRNA表达明显增高，而 模型对照组关节软骨中MMP-3，删P一1 TIMP-1表达明显降低。组间比较有显著性差异(PO．01)。 Ⅱ型胶原阳性染色后，模型对照组，阳性染色显著减少，分布不 均匀，且表浅层出现缺损；经独一味胶囊治疗后，中、大剂量治疗组 与模型对照组比较，中、大剂量治疗组Ⅱ型胶原阳性染色面积明显增 大，比较有显著性差异(P0．01)。检测软骨基质中GAG含量，模型 组与小剂量治疗组比较，软骨基质中GAG含量有显著性差异，P0．05； 中剂量组治疗组、高剂量组治疗组与模型组分别比较，中、高剂量治 疗组软骨基质中GAG含量有显著性差异，P0．01； ¨ 结论 1．Hulth手术方法