玉米中伏马菌素1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇免疫学快速筛选方法研究.pdf

摘要 摘 要 伏马菌素(Fumonisins，FBs)是主要由串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme) 产生的有毒水溶性代谢产物，大多存在于玉米及玉米制品中。其中FBl是伏马 菌素的主要组分，也是导致伏马菌素毒性作用的主要原因。FBl具有神经毒性、 和生物活性相似的有毒代谢产物，是一种单端孢霉烯族化合物，常污染玉米、 小麦和大麦等谷物及其制品，具有免疫毒性、胚胎毒性和细胞毒性等。目前用 于检测FBl和DON的方法主要有生物学鉴定法、理化检测法和免疫分析法 等。其中免疫分析法具有灵敏度高、特异性好、样品前处理简单等优点，适合 于大批量样品的现场快速检测。本实验在自制FBl．OVA、DON—BSA全抗原及 分析法。 采用戊二醛一步法、戊二醛二步法、过碘酸钠法、三聚氰氯法、三聚氰氯快速 法分别制备了不同质量投料比的抗FBt酶标抗体和抗DON酶标抗体。经效价 和直接竞争ELISA测试后，比较得知以三聚氰氯快速法合成的抗FBl酶标抗 体效价最高，可达1024000，IC50值最低，为3．0 ng／mL，该合成方法最简单， 此时合成该酶标抗体需要的抗FBI单克隆抗体与HRP的质量投料比为1：2，抗 二步法合成的抗DON酶标抗体IC50值最低，为75．3 ng／mL，该方法重复性最 好，此时合成该酶标抗体需要的抗DON单克隆抗体与HRP的质量投料比为 1：20，抗DON酶标抗体克分子比为2．69，酶结合率为3．345％，标记率为 0．6935。 利用抗FBl酶标抗体建立了检测玉米中FBl的直接竞争ELISA，经棋盘 滴定确定，该方法的最佳FBl．OVA全抗原的包被浓度为l gg／mL，FBl酶标抗 体(CC．1．FBIMcAb．HRP)的工作浓度为1：32000，ICso=2．97 ng／mL，检测范围 摘要 为0．56--15．6 ng／mL，批内、批间变异系数均小于10％，回收率在83．8--一93．2％， 与FB2的交叉反应率为1 T-2，HT-2)未见交叉反应。 利用抗DON酶标抗体建立了检测玉米中DON的直接竞争ELISA，经棋 盘滴定确定，该方法的最佳DON．BSA全抗原的包被浓度为1 gg／mL，DON酶 标抗体(GA．2．DON ng／mL， 检测范围为16．61～359．36 ng／mL，批内变异系数小于10％，批间变异系数为 HT-2，FB】，FB2)未见交叉反应。 以直接竞争ELISA为反应原理，聚偏氟乙烯膜为载体，建立了一种简便、 快速、高特异性、可同时检测玉米中FBl和DON的膜免疫直接竞争分析法。 样品前处理简单，整个过程只需一步加样，15min内能目测判定结果，该方法 获得的FBI、DON的检测限分别为2．5 ng／mL、50ng／mL，使用有效期不少于 180天，具有稳定性好、结果准确易于判定、经济实用等优点，非常适合于大 批量样品的现场快速检测。 采用自建的直接竞争ELISA和膜基质免疫分析法分别检测了市场上随机 购买的35份玉米样本，检测结果与市售ELISA试剂盒和HPLC结果进行比 较，经统计学分析无显著性差异，相关性良好。 关键词：伏马菌素Bl；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；直接竞争ELISA；聚偏氟乙烯膜 Abstract ABSTRACT Fumonisinsare water