环丙沙星胁迫蚯的毒性效应及蛋白质组学研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………．1 英文摘要……………………………………………………………………．3 英文缩写……………………………………………………………………．6 研究论文环丙沙星胁迫蚯蚓的毒性效应及蛋白质组学研究……………7 前言……………………………………………………………………………………………7日U舌……………………………………………………………………………………………／ 材料和方法……………………………………………………………．7 结果…………………………………………………………………………………………．2I 附图……………………………………………………………………24 附表………………………………………………………………………………………3l 讨论…………………………………………………………………………………………．33 结论…………………………………………………………………………………………．36 参考文献………………………………………………………………36 综述 污染胁迫下蚯蚓蛋白质组学的研究进展…………………………43 致谢………………………………………………………………………．．54 个人简历……………………………………………………………………55 万方数据 中文摘要 环丙沙星胁迫蚯蚓的毒性效应及蛋白质组学研究 摘 要 目的：氟喹诺酮类抗生素有良好的药物动力学性质，被广泛用于人类 疾病治疗、畜牧和水产养殖活动，但其在人及动物体内的代谢率25％， 所以大多数氟喹诺酮类抗生素以原形通过医疗废水、生活污水和人兽排泄 物等途径进入环境。通过水环境迅速扩散至土壤后，被矿物质和有机物所 吸附，并以盐酸盐的形式在土壤中形成累积，其生态毒理学的效应己成为 我国乃至全球所必须面对的重大环境问题之一。本文拟通过对盐酸环丙沙 星对蚯蚓急性和慢性毒性效应及蛋白表达谱的研究，探讨环丙沙星的暴露 毒性和潜在暴露生物标志物，为早期诊断和评价环境中环丙沙星生态污染 风险提供实验方法和数据参考。 方法：参照经济合作与发展组织(OECD)*O定的相关准则，蚯蚓的急 性毒性试验采用滤纸接触染毒法(≤96h)和人工土壤染毒法(≤14d)，慢性 毒性试验采用人工土壤染毒法(14d)。测定滤纸接触法中各个时间点(24 h，48h，96 h，1d，2d， h)的半数致死量(LD50)和人工土壤法中各个时间点(12 7d，14d，28d，56 果，选取关键的四个时间点(2d，7d，28d，56d)做苏木素．伊红(既)染色病 理组织切片，同时提取各组蚯蚓的总蛋白，利用双向电泳(2-DE)和基质辅 库的信息，寻找各个时间点的差异表达蛋白，然后选择部分蛋白，通过蛋 白印迹法(Westernblot)，验证质谱鉴定结果。 h、48 结果：在滤纸接触染毒试验中，暴露24 h和96h后的LD50依 次为2．20×10’1 nag·cm-2、1．60×104mg·cm‘2和1．12×10’1mg·cm-2；在人 工土壤染毒试验中，盐酸环丙沙星在最大试验浓度5000 mg·kg。1时未引起 000 蚯蚓死亡，说明人工土壤染毒法暴露7d和14d的LD50均大于5 000 d后的POD活 mg·kg-1。酶活性测定结果为，1mg·kg-1浓度组暴露2