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环磷酰胺与异环磷酰胺致肝毒作用机理探讨 摘要 摘要 环磷酰胺(CP)与异环磷酰胺(IFO)同属氮芥类烷化剂，在化学结构上 仅有一个氯乙基位置不同。两药在体外均无活性，必须进入体内经微粒体P450 代谢活化后才能发挥烷化作用。文献报导CP具有肝毒作用，而IFO在此方面 未见专门报导。本研究以整体大鼠和新鲜分离的大鼠肝细胞为实验材料，从氧 化性细胞损伤角度入手，观察了两药对肝细胞的毒性，并对可能的致毒机理进 行了探讨。研究中建立了大鼠肝细胞分离培养的方法，并对其进行功能考察， 认为该法可以满足本研究工作的需要。 【体内实验表明，大鼠经腹腔注射cP或IFO(200 mg·瞎1·d-1×5d)后，血浆生化指标和肝组织中丙二醛含量未见显著变化， 肝组织中巯基状态则发生了明显改变，总巯基、非蛋白巯基、蛋白巯基均有不 同程度下降，在停药后第7天降至最低值，第10天有所恢复，其中蛋白巯基 的下降在总巯基的耗竭中起了主要作用。体外实验发现CP和IFO在高于10mM 的浓度下不仅引起混悬培养肝细胞的存活率下降，胞内LDH、ALT、AST泄 漏，还引起胞内总巯基、非蛋白巯基、蛋白巯基下降，上述变化均呈现明显的 量效和时效关系。研究发现无论体内、体外实验，等剂量条件下，CP引起肝 损伤的各项指标改变除个别点似有比IFO严重的趋势外。大部分时间点两药引 起的改变没有显著性差异。体内实验还表明，CP和IFO对肝微粒体P450有抑 制作用，CP引起肝微粒体P450含量逐步下降，停药后第7天降至最低值，第 似的抑制规律。形态学观察发现CP可致肝小叶中央区肝细胞萎缩，严重时出 现点状及小灶性坏死，坏死区和汇管区慢性炎细胞浸润，散在肝细胞空泡变性。 IFO致肝小叶中央区肝细胞明显空泡变性，散在点状及小灶性坏死，坏死区和 汇管区慢性炎细胞浸润。扫描电镜发现肝细胞表面出现鼓疱是CP和IFO对肝 细胞毒性的～种反应，大疱脱落，细胞表面修复出现凹陷区，大疱溃破，细胞 表面出现小孔，引起胞内酶泄漏。进一步观察肝细胞内部结构发现CP和m0 作用下的肝细胞内出现大量次级溶酶体，细胞内空泡数量显著增多，此外还可 见到粗面内质网扩张，脱颗粒，滑面内质网囊泡变，线粒体高度水肿，嵴断裂， 军事医学科学院毒物药物研究所 第1页共107页 环磷酰胺与异环磷酰胺致肝毒作用机理探讨 摘要 排列紊乱甚至消失，有的线粒体呈空泡化，有的则变形、扭曲。在我们观察的 时间点两药引起的这些改变没有显著差异0—、一 通过以上实验，我们认为cP和IFO对肝细胞毒作用不仅可能表现在肝功 能的损害上，还表现在肝细胞形态结构的改变和对微粒体混合功能氧化酶功能 的抑制，临床使用时对肝脏损伤的判断不应只限于肝功能测定。阵剂量条件下， cP引起肝损伤的各项指标改变以及形态学变化似比IFO的严重，但仅在个别 点上有统计学意义。由于IFO临床使用剂量为CP的4—5倍，临床上对IFO 引起的肝损伤仍应给予高度重视。本研究表明CP和IFO对大鼠肝有损伤作用， 导致肝损伤的机理主要与氧化应激致细胞内巯基状态的改变、细胞骨架破坏高 度相关。细胞内钙稳态是否参与cP和IFO致肝损伤有待深入研究。尹一、一 荚■词t环磷酰胺；异环磷酰胺；肝细胞；巯基；氧化性损伤；P450；光 镜；电镜 军事医学科学院毒物药物研究所 第2页共107页 环磷酰胺与异环磷酰胺致肝毒作用机理探讨 ABSTRACT ABSTRACT and bomwell—known ifosfamide(IFO)arealkylating Cyclophospharnide(CPl inthestructuresofthem difference isthereisa