玉米赤酶烯酮引HEK-293细胞DNA链断裂的溶酶体途径.pdfVIP

玉米赤酶烯酮引起HEK．293细胞DNA链断裂 的溶酶体途径 硕士生姓名：高凤 指导教师：刘晓芳副教授 专业名称：劳动卫生与环境卫生学 摘 要 活性的真菌毒素，主要由镰刀菌属真菌产生。广泛的存在于发霉的玉米、小麦、 大麦等粮谷类农作物及其食品中，污染率较高，是世界范围内粮食饲料的污染物 之一，对人畜构成很大的危害。 forResearchon 国际癌症研究机构(International Agency 对人类的致癌性归为第三类，即现有证据尚不能就其对人类致癌性进行分类。研 究表明，ZEN具有致癌性、生殖毒性、遗传毒性、免疫毒性和致突变性。此外， 有研究显示ZEN的遗传毒性与细胞中活性氧类(ROS)的生成增多有关。最近的 一些研究发现，溶酶体膜稳定性改变和线粒体膜电位的改变与DNA的损伤有关。 因此，我们研究了ZEN引起的DNA损伤与细胞内ROS水平以及溶酶体和线粒体 的关系，旨在探讨ZEN遗传毒性的机制。 本研究选用人肝肾HEK．293细胞，探讨玉米赤酶烯酮的DNA损害作用及可 能的机制，为进一步评估ZEN对人类的健康危害提供实验资料。 检测细胞DNA的损伤情况，评价ZEN的遗传毒性。为探讨其可能的遗传毒性机 制，以2’，7’—二氢二氯荧光素(DCFH)法测定细胞内ROS的水平，用吖啶橙 (Acridine orange)和罗丹明123(Rhodamine123)分别测定细胞内溶酶体膜稳定性 和线粒体膜电位的改变水平；分别采用羟基酪醇(HD，氯化铵(NH4C1)，抑胃肽 (pepstatin SPSSvl 1．5统计软件包进行统计分析。 h后，引起细胞内溶酶体膜 结果：2．5209M的ZEN作用于HEK-293细胞1 稳定性发生改变；作用2h后，可引起细胞内线粒体膜电位下降、ROS水平增加、 DNA链断裂，细胞形成彗星样拖尾，其尾长明显增长，且呈剂量依赖关系。分别 用lOmM的NH4Cl、1 00肛M的pepstatin 细胞1h后，ZEN引起的DNA链断裂几乎完全被阻止。但用6．25--一25 IIM的HT 预处理后，ZEN所引起的HEK-293细胞溶酶体膜稳定性和DNA链断裂没有得到 明显的改善。溶酶体在酸性环境下容易发生破裂，用10mM的NH4CI预处理提高 它的PH值后，细胞内溶酶体膜的稳定性及线粒体膜电位都得到了很好的保护。 结论：玉米赤酶烯酮可致HEK．293细胞DNA链断裂，其作用机制可能与溶 酶体途径有关，通过溶酶体膜稳定性的破坏，释放一些溶酶体水解酶，从而导致 的DNA链断裂，说明ZEN所引起的DNA损伤可能不是氧化性的损伤，而是通过 溶酶体途径引起的。溶酶体可能是ZEN细胞毒性的生物靶点之一，是遗传毒性的 早期事件。 关键词：玉米赤酶烯酮DNA链断裂溶酶体膜稳定性线粒体膜电位ROS 2 The ofDNAstrandbreaksinduced lysosomalpathway by — Ze盈xalenon,。HEK．293earalenoneinH Cel—ls Master Gao degree candidate：Feng Liu Sup