紫外辐射对人角形成细胞的细胞周期调控的影响.pdfVIP

缩略词表 摘 要 目的建立紫外辐射损伤人角质细胞(HaCaT细胞株)的模型。研究 UVB对细胞周期的进程和细胞凋亡情况，并研究了维生素E(VE)对紫外 照射的保护作用以及相关基因p53和bcl一2在这些作用下的表达。方法 采用细胞培养、MTT染色法、流式细胞技术、western蛋白免疫印迹法等 技术观察不同剂量UVB照射下培养不同时间后的HaCaT细胞存活率、细 胞周期分布及凋亡的发生以及加入抗氧化剂后的情况，以及上述情况下 p53、bc卜2表达的变化。结果l_UVB剂量不同，培养时间相同时，随剂 量增加，存活率逐渐减少：照射剂量相同，培养时间不同时，随时I司延 长，细胞存活率下降到最低值后有恢复(照射15min除外)。2．细胞周期 结果分析表明：小于5min的UVB照射剂量，随着细胞培养时间的延长， 剂量，随培养时间延长细胞增殖指数逐渐减少。UVB以时阳J剂量依赖方 式抑制HaCaT细胞增殖能力。3．无论是从形态学还是流式细胞图我们发 现HaCaT细胞在J下常情况下也存在细胞凋亡。4．随UVB剂量增加，培养 时间相同时，凋亡率逐渐增加；照射剂量相同，随培养时问延长，凋亡 率也逐渐增加。5．VE对UVB照射所致的HaCaT细胞生长抑制有保护作用， 40 u∥ml为VE最佳剂量并且予照射前和照射前后加入保护作用更佳。6． 加入VE后对UVB照射后的PI值明显升高，细胞凋亡率降低了约50％。 后12h达峰值；p-p53的表达维持12h。bcl一2表达显著降低，照射后24h 内都维持较低水平。8．VE的加入使UVB诱导HaCaT细胞中p53基因表达 下降，检测不到p-p53(Serl5)的表达。而bcl一2表达量增加，随培养 时间延长bcl一2逐渐下降。结论UVB在一定的照射剂量和培养时间内抑 制人角质细胞的生长。UVB诱导HaCaT细胞发生G1期为主的细胞周期阻 的基因表达在UVB诱导的损伤反应中起一定作用。bcl一2参与了vE对UVB 的损伤保护作用。 关键词：紫外辐射；维生素E；细胞周期阻滞；细胞凋亡：HaCaT细 胞：mT法：流式细胞术；western蛋白印迹法 ABSTRACT To a modeofultravioletirradiatedhuman estab·lish objectite the cell to effectsofUVBonthe investigate line)．Aim keratinocytes(HaCaT ofcell and Andobservethe effectsof cycleapoptosis protective procession VE UVBradiation．Andto the ofrelated against studyexpression genep53， meansofcell condition．Methods culture．MTT bcl一2onhereinbefore By cell andwesternblot HaCaT cytomer analysis，weanalyzed assay，flow cell