甲壳低聚糖、甲壳低聚糖-硒对THP-1源性巨噬细胞脂质转运及抗氧化酶相关基因表达的影响.pdfVIP

目录 中文摘要3 英文摘要5 正文7 前言7 材料与方法9 实验结果15 讨论31 结论36 参考文献37 综述41 附录 1：攻读硕士期间发表的论文49 附录 2：缩略语词汇表50 致谢51 2 中文摘要 甲壳低聚糖、甲壳低聚糖－硒对 THP-1 源性巨噬细胞脂质转运 及抗氧化酶相关基因表达的影响 研究生：黄春林 导 师：李邦良教授 曹运长博士 目的： 一、完善甲壳低聚糖－硒的合成方法，提高产品的产量和纯度。 二、研究甲壳低聚糖、甲壳低聚糖－硒对 THP-1 源性巨噬细胞脂质转运及抗氧化酶 相关基因表达的影响。 方法： 本研究分以下两部分 一、甲壳低聚糖－硒的合成及检测方法的完善：将甲壳低聚糖与硒络合成甲壳低聚 糖－硒，对络合物进行紫外、红外光谱检测，并用紫外分光光度法测定甲壳低 聚糖－硒中的硒含量。 二、用 100ug/ml 的甲壳低聚糖及甲壳低聚糖－硒分别处理THP-1 源性巨噬细胞 6 小 时、12 小时、24 小时、48 小时，运用半定量逆转录多聚酶链反应方法检测其 LDL 受体、CD36、ABCA1 、SR-BI 及 SOD、GSH-Re 、NOS 的 mRNA 的变化。 结果： 一、甲壳低聚糖-硒水溶液中不存在游离的硒离子，紫外及红外检测说明硒和甲壳低 聚糖形成了稳定的络合物，此络合物中含硒元素 683.5 μg/g 。 二、甲壳低聚糖各处理时间组与各相应对照组比较：LDL 受体、CD36 的mRNA 表 达下调具有显著性；ABCA1 、SR-BI 的 mRNA 表达上调具有显著性；SOD、 GSH-Re 的 mRNA 表达上调具有显著性；NOS 在 6 小时处理组的 mRNA 表达 具有显著性，超过 6 小时无表达。 三、低聚糖－硒各处理时间组与各相应对照组比较：LDL 受体、CD36 的 mRNA 表 达下调具有显著性；ABCA1 、SR-BI 的 mRNA 表达上调具有显著性；SOD、 3 GSH-Re 的 mRNA 表达上调具有显著性；NOS 6 小时处理组的mRNA 表达上调 具有显著性，超过 6 小时无表达。将甲壳低聚糖－硒与甲壳低聚糖各相应处理 时间组比较：LDL 受体、CD36、ABCA1 、SR-BI 的 mRNA 表达无统计学学意 义；而 SOD、GSH-Re 及 NOS 的 6 小时处理组的 mRNA 表达上调具有显著性。 结论 ： 一、甲壳低聚糖能与硒形成络合物，配位基团主要是氨基，其次羟基也有一定的配 位能力。此络合物没有杂质，甲壳低聚糖的结构没有因硒的络合而受到破坏。 二、甲壳低聚糖和甲壳低聚糖－硒均能上调ABCA1、SR-B1 的 mRNA 表达水平，下调 CD36、LDL 受体的 mRNA 表达水平，二者作用水平相当。根据这些基因表达产物 的功能分析，证明二者（主要是甲壳低聚糖成分）有促进胆固醇的逆向转运作 用。 三、甲壳低聚糖和甲壳低聚糖－硒均能上调NOS、GSH-Re 和 SOD 的 mRNA 表达水平， 而甲壳低聚糖－硒比甲壳低聚糖上调更加明显。由此说明二者均有较强的抗氧 化作用，且甲壳低聚糖－硒抗氧化作用更强，在使用剂量范围不出现硒的毒性 反应。 关键词 ： 甲壳低聚糖 甲壳低聚糖－硒 糖尿病 THP-1 细胞 抗氧化 4 ABSTRACT Effects of Selenium