中药“腰痛定”体外培养星形胶质细胞的影响.pdfVIP

Y 709125 郑重声明 本人的学位论文是在导师指导下独立撰写井完成的，学位论文没有票」窃、抄 袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为，本人愿意承担由此产生的法律 责任和法律后果，特此郑重声明。 学位论文作、。签名):枷-0 2005年 4月25日 湖北hr}:学院 顿 {_研究生毕业沦义 中 文 摘 要 目的 脊髓损伤(SpinalCordlnjury,SCI)是骨伤科临if,常见的严重疾患，主要是由 交通事故、高处坠落、重物砸伤及老年人(有颈椎退变基础)摔倒等多种原因引起， 导致脊髓或马尾神经发生不同程度的损伤。SCI后出现脊髓出血、水肿、坏死、 囊腔形成、退变胶质化等一系列病理改变，以致神经元丧失、轴突脱髓鞘，临床 表现为受损平面以下的运动、感觉、反射及括约肌功能的障碍。而星形胶质细胞 位于中枢神经系统内，是一种能改变脊髓损伤后的微环境，防止继发性损伤，并 可形成再生轴突的引导通道，分泌大量神经营养因子和细胞分子，促进和诱导神 经组织有效修复再生，促进肢体功能恢复。本实验选用的 腰“痛定注射液”由多 味行气活血的中药组方，用其制成的 腰“痛定”药物血清对小鼠(脊髓)星形胶 质细胞进行体外培养，通过观察加药后细胞增殖的情况，选择合适的药物浓度， 为研究中药治疗脊髓损伤的机理提供可靠的实验依据. 方法 在细胞毒性实验中，取经传代培养的小鼠(脊髓)星形胶质细胞，用胰酶消 化后接种到培养板上，并随机分为实验组和对照组。在实验各组中分别加入浓度 不同的 腰“痛定”药物血清，培养24小时后在显微镜下观察细胞形态，并用MTT 比色法对星形胶质细胞的进行药物毒性分析，根据分析结果确定进行细胞增殖实 验的药物浓度。 在细胞增殖买验中，根据由毒性实验选择的药物浓度，将传代培养的星形胶 质细胞随机分为实验组和对照组，分别观察各组细胞在体外培养24小时、48小 时和72小时后增殖情况的变化，并记录MTT法分析后的实验结果。 用流式细胞术测定细胞增殖情况，是将星形胶质细胞接种到细胞培养皿中， 按实验要求随机分为对照组和药物组，两药物组中分别加入浓度不同的腰痛定药 物血清。体外培养72小时后，在流式细胞仪上测定各时相细胞所占的比例，并 结合增殖指数 (Prl值)反映星形胶质细胞的增殖活性。 实验数据采用T-test,P0.05为显著性差异，检测值统计处理的结果用均 数土标准差 (x1S)表示. 结果 细胞毒性实验中，相差显微镜下观察到100mg/ml组的细胞大量崩解死亡， 50mg/ml组与25mg/ml组的细胞出现明显收缩，表明腰痛定药物血清在浓度较高 时对细胞有明显毒性作用。根据MTT测试结果计算出细胞生长的ID,a半〔数存活 抑制浓度)约为 100mg/ml，而较低浓度药物表现出促进细胞增殖的作用，且药 物浓度12mg/ml的各组之间差异无显著性意义(P0.05)。因此确定进行细胞 增殖实验的药物浓度分别为:50mg/ml,25mg/ml,12mg/ml,6mg/ml, 细胞增殖实验中的MTT测试结果表明，低浓度 (6mg/ml)药物对星形胶质细 胞增殖有明显促进作用，尤其是72小时后的MTT测试结果与对照组相比，差异 湖_1L,亡I%:学院 Got}()I了0_Tlk 义 有显著性意义 (P0.05)高浓度组 (50mg/ml,25mg/ml,12mg/ml)则显示抑制 作用，48小时与72小时后的MTT测试结果与对照组比较，差异均有显著性意义 (P0.05)。 流式细胞术中各时相细胞所占比例以及增殖指数 (Prl值)表明，浓度为 6mg/ml的药物组能促进细胞增殖，其。NA合成期细胞所占百分比(S%)和Prl值[包 括DNA合成期(S),DNA合成后期(G2)和有丝分裂期(M)的细胞所占百分比，即 (S十G,/M