一个与大鲵蛙病毒（ADRV）感染相关基因—6R的克隆、原核表达及其产物分离.pdfVIP

中国水产科学 2015年 3月，22(2)：353—358 JournalofFisherySciencesofChina 研究简报 Doh 10．3724／SP．J．1118．2015．14371 一 个与大鲵蛙病毒 (ADRV)感染相关基因一 的克隆、原核 表达及其产物分离 李涛 一，陈中元 一，张奇亚 ，2 1．中国科学院 水生生物研究所，淡水生态与生物技术 国家重点实验室，湖北 武汉430072； 2．中国科学院大学，北京 100049 摘要：在新近报道大鲵蛙病毒 ndriasdavidianusranaviurs，ADRV)基因组的基础上，我们对ADRV6R进行了克隆、 原核表达及其产物的分离，这是一个经生物信息分析表明与病毒感染相关的功能基因。先经 PCR扩增长到 7l1bp的 ADRV6R，构建含扩增片段的克隆质粒 pMD18-T-6R。再构建原核表达质粒 pET-32a．6R，进行测序，并与水生动物 蛙病毒相关基 因同源序列进行比对，该扩增片段与预期一致，其编码分子量约为 27kD、含 236个氨基酸的蛋 白， 与水产动物病毒 US22蛋白家族 (US22familyprotein)成员有很高的同源性 。然后对 pET-32a．6R进行转化、诱导表 达，并利用Ni．NTAHis．Bind亲和层析及不同浓度咪唑洗脱液对表达产物进行分离、电泳分析，结果显示，获得与 预测分子量相符的45kD融合蛋 白f27kD 目的蛋白与 18kDHis标签)。这为后续制备抗体 、并开展大鲵蛙病毒与 宿主的相互作用研究提供 了有用的实验材料 。 关键词：大鲵蛙病毒 (ADRV)；ADRV6R；感染相关基因；US22蛋 白家族；原核表达；蛋白分离 中图分类号：S94 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2o15)o2—0353—06 中国水产养殖的成就已被认为是中国对当今 为遏制大鲵蛙病毒病扩散，认识病原的本质 世界发展的重大贡献之一[1】。而中国大鲵 ndrias 特征，本实验室从新建和筛选大鲵细胞系、对大 davidianus)作为世界上现存最大的两栖动物，也 鲵病样中的病毒病原进行体外培养、扩增、分离 是 中国所特有的二级保护动物，有很高的科研和 鉴定及基因组测序等多方面开展 了研究，并于 经济价值。野生大鲵主要分布于长江、黄河和珠 2013年首次报道了大鲵蛙病毒 ndriasdavid- 江水系。由于野生大鲵存量少，繁殖率低，为了适 ianusranavirus，ADRV)全基因组序列 J。阐明 应国内外市场需求，近年大鲵工厂化养殖技术正 ADRV是属于虹彩病毒科的蛙病毒属中一个新成 在推广中，养殖规模迅速扩大。但据报道，无论是 员，其基因组全长为 106734bp，含 101开放阅读 野生还是养殖大鲵都普遍受到病毒病，尤其是蛙 (ORFs)。同时我们还注意到，在ADRV基因组中， 病毒病 (ranavirusdisease)的严重危害，引起体表 有一个编码与病毒致病相关的US22家族蛋白的 内脏出血及系统性疾病流行，导致野生种群数量 基因 ，这是一个可能与病毒感染性相关的基 下降和养殖大鲵大量死亡[2-51。因此，大鲵病毒病 因。现已知 US22家族基因(US22familygene)存 的危害已受到养殖场与主管部门、野生动物保护 在于一些动物 DNA病毒基因组 中，该家族编码 组织及水产医学领域科技人员的高度关注。 产物至少含有 4个氨基酸序列的保守基序(motif)， 收稿 日期：2014．09．04；修订 日期：2014—09．28． 基金项 目：国家科技支撑计划课题 (2012BAD25BO2)． 作者简介：李涛 (1992一)，男，研究生，现正从事水生病毒分子生物学研究．E-mail：469445704@qq．com 通信作者 ：张奇亚，教授 ．E．mail：zhangqy@ihb．ac．cn 354 中国水产科学