苏云金芽胞杆菌4.0718菌株伴胞晶体中20kb+DNA基因文库构建和同源性的分析.pdfVIP

摘 要 苏云金芽胞杆菌(肋r，，／，￡，s芒力盱j力酊鲫sj$简称Bt)在芽胞 形成过程中能产生对fI糊：j荨虫具有特异性毒杀作用的伴胞晶体。研究 表明伴胞晶体中存在与原毒素相卫：作用的20kbDNA片段，该片段对 晶体的形成及杀虫晶体蛋白在敏感害虫体内的激活过程具有重要的 作用。但是，与毒素蛋白结合的20kbDNA的序列信息仍未得到闸明。 本论文旨在利用基冈文埔i的技术手段，挖掘20kbDNA更多的序列信 息，进一步对Bt野生菌株晶体中DNA的序列与来源进行研究，为探 kb 讨晶体中原毒素与20 DNA的结合机制以及20kbDNA的功能提供 基础。 在本研究中，以本室选育的Bt野生菌株4．0718为材料，提取与 晶体蛋白CrylAc相结合的20kbDNA，以其＆龆AI部分酶切片段为 供体、pbluescriptII(SK+)为载体构建基因文库。基因文库建立后， 通过检验文库的随机性、插入片段的平均长度、载体自连率等对文库 CB DNA 进行比对，根据N I输出的比对结果分析Bt基因组和20kb 之间的同源性。比对结果发现20kbDNA中存在来源于Bt染色体的基 rRNA基因、23S 因，如16S rRNA基因、编码RNA聚合酶亚单位的基 因嘲编码金属氨肽酶的基因p印驮编码细菌毒力因子硫酸透明 质酸酶的基因sUJ尸、以及编码与转座相关的解离酶基因芒印肮同源 性分析结果证明，Bt染色体上的基因参与20kbDNA的序列构成，即 20kb DNA来源于宿主菌的染色体。 研究结果证实了20kbDNA来源于Bt染色体，并新发现了来自染 色体的基因。本研究为进一步阐明Bt伴胞晶体中20kbDNA分子的来 源、结构、功能及其与原毒素的相互作用机制奠定了重要基础。 关键词： 苏z：金翻：胞”菌，20kbDNA，基因文库，染色体，州源性 Il ABSTRACT 易lacj』7“s w hasbcE、nidelusedforinsect 砌脚刀百8，7s，s y contr01becauseofthe fic 】arvicidal of speci activity duri lation．It was parasporalcrystalsproducedngsporu proved thatthe contained20kbDNA parasporalcrystals fragments associatedwith ins，which a intimately protox playimportant roleinthe and of as assemblingstabilityparasporalcrystals well astheactiVationof toxininthe of crystal midguttarget 1rarVae．