粟酒裂殖酵母中Programmed+Cell+Death+2_C蛋白功能的研究.pdfVIP

摘要／Abstract rll 』舢舢幽舢舢MJ『『『『JJ『『f册删III。 Y1 7．．．．,,2,,,Jl p6fi,,i6llll10l I,2II 摘要 背景：凋亡是有机体在漫长的进化过程中发展起来的细胞自杀机制，在清除 无用的、多余的或癌变的细胞，维持机体内环境稳态方面发挥重要作用。最早对 CellDeath ProgrammeD protein2(PDCD2)研究发现该蛋白可能参与细胞凋亡。 但随着对其研究的深入，发现该蛋白似乎与细胞凋亡无关，但是和细胞的发育， 细胞周期以及某些疾病有一定的联系。PDCD2蛋白具有一个重要的功能结构域 现PDCD2一C蛋白似乎只存在真核生物细胞中。并且这类蛋白由看家基因编码，在 人和小鼠各个组织都有表达。在裂殖酵母中存在两个PDCD2一C蛋白： 的功能还未有报道，本文主要探究这两个PDCD2 C_。能功的白蛋 实验和结论：1．首先用同源重组和随机孢子分析法，证明了裂殖酵母中pcdl 为必需基因，pc以为非必需基因。这提示这两个PDCD2一C蛋白在裂殖酵母中的 功能可能不同。接着用高表达和低表达的pcdl的质粒，都能救活因敲除pcdl致 死的单倍体。直接敲除裂殖酵母单倍体pcd2,敲除菌株能正常生长。这两个实 验都再次证明pcdl为必需基因，pc以为非必需基因。 2．用高表达和低表达N端带2个FLAG标签pc棚的质粒都能救活敲除pc以的 的质粒都不能救活敲除了pcdl的单倍体。这些实验提示：N端2个FLAG标签对 功能不同，也有可能在裂殖酵母中pcdl还有其他必需功能；人PDCD2_C结构域 C结构域替代裂殖酵母 也不能替代裂殖酵母PDCD2．．C结构域，可能因为人PDCD2 的结构域后整个蛋白的空间结构遭到破坏，导致蛋白功能丧失；pcdl和pcd2功 阻碍了pc棚与其相互作用蛋白的结合。 ． 3．敲除pcd2的单倍体在面对逆境压力时，生长状态和野生型几乎一致。这表 示pcd2在裂殖酵母的应对逆境过程中没有必需的作用。 4．利用酵母双杂交系统中的筛选，与pcdl和pcd2相互作用的蛋白。发现moel RNAhelicase Hca4)的片段可能与pcd2相互作用。但是验证上述蛋白全长是否 摘要／Abstract 和pcdl和pcd2相互作用时，都未能检测出相互作用。利用该系统仍未检测了 pcdl和SPACl002．14(裂殖酵母中泛素化连接酶Z3)相互作用。 在一定的联系，或者共同参与了某种信号传导途径；而st#可能不是pcd2的磷 酸酶。 关镁tir,q．粟酒裂殖酵母，PDCD2一C蛋白，功能研究 摘要／Abstract 一一————————————————