国产吲哚菁绿前膜染色对兔角膜内皮活性的影响.pdfVIP

国产吲哚菁绿前囊膜染色对兔角膜内皮活性的影响 硕士研究生： 李 佳 指导教师： 张丰菊教授 指导小组： 孙洪臣教授 马 翔教授 专业名称： 眼科学 摘 要 目的：研究不同浓度与不同时间条件下国产吲哚菁绿前囊膜染色剂 对活体兔角膜内皮细胞活性的影响。 方法：选择健康科研用兔18只(36眼)，无眼疾，体重2．8～3．0kg， 雌雄不拘。由大连医科大学实验动物学部提供。随机分为4组，即分别为 A组2．5毫克／毫升、B组5毫克／毫升、C组7．5毫克／毫升的国产吲哚菁绿溶 液组，D组为平衡盐液对照组。其中A、B、C三组溶液配制方法为分别将 12．5毫克、25毫克、37．5毫克的国产吲哚菁绿冻干粉末溶解于0．5毫升灭 菌注射用水中，将该混合溶液摇晃均匀约5分钟，待溶液均匀绿色无可见 颗粒后，分别加入4．5毫升平衡盐液稀释吲哚菁绿溶液浓度即得到2．5毫 克／毫升、5毫克／毫升、7．5毫克／毫升的国产吲哚菁绿溶液。D组为按照注 射用水与平衡盐液比例1：9配置与试验组吲哚菁绿溶液相同渗透压的平 衡盐液做对照液组，四组溶液渗透压经测定接近于房水渗透压。每组9眼， 每组分3亚组分别给予上述溶液作用30秒、60秒、90秒。动物模型具体制 备方法为各组兔全身麻醉后，将其俯卧固定于手术台上，开睑器开睑， 固定眼球。选择角巩膜缘位置，前房穿刺刀在颞上方角巩膜缘穿刺前房， 再用27号钝针头经角巩膜缘紧贴前囊中央依据各组要求注入约O．3毫升 ，新鲜配制的不同浓度吲哚菁绿溶液或对照液平衡盐液，操作过程中注意 保护角膜内皮。待指定时间30秒、60秒、90秒后，做辅助侧切口，前房立即 注入粘弹剂玻璃酸钠维持前房、保护角膜内皮细胞，沿兔眼角膜缘用显 微剪小心取下角膜。将取下的角膜用包裹液立在载玻片上，迅速移入．20 ℃AO低温恒冷切片箱，待速冷成型后，每只角膜在中央区切成81．tm的角 膜冰冻切片6张，放入新鲜配置的NADH，LDH孵育液各2张进行孵育，另 外2张切片分别作对照投入未加底物的2种酶孵育液内，保温箱中37℃孵 胞内，利用酶的组织化学染色方法测定组织细胞内乳酸脱氢酶(LDH)与 0％福尔马林溶 还原型辅酶I(NADH)I的酶活性改变。剩余部分角膜投入1 液固定，按常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色步骤制作组织学切片， 厚度为5p,m，显微镜下观察。数据的处理可取各个不同处理组4张酶活性 染色的切片，显微固像分析仪下随机取酶反应带上6点，测定LDH、NADH 二组酶存在，酶活性以平均累积光密度值表示，采用SPSS11．0软件进行 方差分析，并比较不同浓度国产吲哚菁绿溶液组内3个时间段与对照组3 个时间段之间兔角膜内皮细胞酶活性的差异，P0．05则差异具有显著性 意义。在有显著性统计学意义实验组内进行酶活性与时间关联性统计学 分析。 结果：LDH、NADH活性在A组、B组与D组比较差异均无显著性意 86．12a：12。124、 LDH光密度值分别为1 义(P0．05)，而C组在30s、60s、90s 165．39+1 组比较差异均有显著性意义(P0．05)。C组组内，酶的活性与药物接触 角膜时间呈线性关系，负相关r一0．45。(P0．05)。 结论：本研究结果显示0．75％国产吲哚菁绿溶液在90秒内即可对兔角 膜内皮细胞产生毒性作用，并且毒性大小取决于该浓度下的作用时间， 时间长则毒性作用加强，呈现一定的相关性。O．25％与O．5％的国产吲哚菁 绿溶液在90秒内对兔角膜内皮细胞无毒性。因此，在眼外科手术中使用 O．25％与O，5％的国产吲哚菁绿染色剂在90秒内染色眼内组织时，可能不影 响人角膜内皮细胞活性。在保证晶状体前囊膜染色效果的同时，推荐使 用低于0．5％国产吲哚菁绿溶液更为安全、可靠。 关键词：吲哚菁绿 兔 角膜