林生地霉的形态观察及体内药物敏感性实验研究.pdfVIP

中文摘要 林生地霉的形态学观察及体内药物 敏感性实验研究 摘 要 种罕见地霉。2002年，首次从巴西的果蝇和印度柞蚕幼虫 身上分离出【l】。同年，我科首次从一脓癣患儿皮损中分离得 到一株林生地霉。2005年，我科又白一例中毒性表皮坏死 松解症患者的血液中分离出一株林生地霉。李秀丽等【2】对皮 损分离株进行了初步的形态学观察和体外药敏试验。 本研究一方面通过对林生地霉血液分离株的形态学观 察，进一步了解林生地霉的形态学特征与产孢方式，为临床 上诊断林生地霉病提供指导；另一方面，应用氟康唑、伊曲 康唑、特比奈芬三种常用抗真菌药物治疗系统性林生地霉感 染小鼠，通过对试验小鼠中位生存时间和生存率以及心、肝、 脾、肺组织的真菌逆培养阳性率和肾脏组织载菌量的检测来 评价它们在小鼠体内抗林生地霉的活性，为临床上治疗系统 性林生地霉感染提供依据。 方法： 1 核酸序列数据库进行同源序列检索，通过系统树显示其亲缘 关系。 2血液分离株的形态学观察 中文摘要 2．1大体菌落观察取血液分离株置常温下复苏，3天后转 种于SDA培养基，37℃和27℃温箱培养，每天观察菌落的 生长情况。 2．2光镜观察：分别取其丝状型和酵母样型菌落标本置于载 玻片上，lO％KOH溶液溶解后，盖上盖玻片，光镜下观察。 2．3扫描电镜观察：取两个温度下培养～周的菌落标本，置 于4％的戊二醛中固定，常规制片后在扫描电镜下观察。 2．4透射电镜观察：取两个温度下培养一周的菌落标本，置 于2．5％的戊二醛中固定，常规制片后在透射电镜下观察。 3体内药敏试验 3．1林生地霉系统感染动物模型的制作：取皮损分离株经复 苏转种后的菌落，用无菌生理盐水制备成菌悬液，通过腹腔 注射途径接种至应用环磷酰胺免疫抑制的小鼠。 3．2给药方法接种后2h开始给药，氟康唑、伊曲康唑、特 比奈芬均为1Om∥(蟾．d)，腹腔注射，1天1次，连续5天。 3．3生存观察连续观察小鼠接种后21天内的自然死亡情 况，记录死亡日期和死亡只数。 3．4组织逆培养各脏器用组织研磨器研碎后挑取少许接种 于沙堡氏试管培养基，37℃温箱培养。 3．5肾脏组织载菌量(CFU)的测定肾脏组织经研磨器研 碎后，用无菌生理盐水稀释至1ml，取10斗l组织悬液均匀 涂布于平皿培养基表面，48小时后读取菌落数。 结果： 1 DNA序列分析结果 rDNA 血液分离株(Hebei．1)26S 1个碱基的差异，与林生地霉模式菌株比较有4个碱基的差 中文摘要 rDNA 异，鉴定为林生地霉。基于26S D1／D2区序列分析的 缘关系最近。 2大体菌落观察培养第2～3天，菌落开始生长，初为白色 绒毛样、粉末样，1～2周后菌落均转变为乳酪样，其中37℃ 下培养的菌落转变较早。 3光镜下观察菌丝相时，光镜下可见丰富的分支分隔菌丝、 成链的关节孢子和圆形、椭圆形小分生孢子。酵母相时，光 镜下可见丰富的单生或串生的芽生孢子，少量的厚膜孢子、 外生或内生的关节孢子，菌丝稀少。 4扫描电镜观察可见菌丝分支末端或侧面着生球形、棒状 的分生孢子，末端凹陷。 5透射电镜观察可见分生孢子与菌丝分离时全壁断裂，另 一端正在出芽。 6真菌逆培养结果 氟康唑和伊曲康唑治疗组小鼠心肺组 织真菌培养阳性率较特比萘芬治疗组和生理盐水对照组均 低，有显著性差异。余下各组中同一脏器的真菌逆培养阳性 率比较均无差异。 7肾脏组织载菌量 伊曲康唑和氟康唑治疗组中小鼠的肾 脏组织载菌量较特比萘芬治疗组和生理盐水对照组均有显 著减少；特比萘芬治疗组中小鼠的肾脏组织载菌量较生理盐 水对照组无显著性减少：氟康唑治疗组中小鼠的肾脏组织载 菌量较伊曲康唑治疗组显著减少。 结论： 1林生地霉血液株有丝状型和酵母样型两种菌落形态而皮 损株只有酵母样型。链状排列的矩形关节孢子、椭圆形或圆