柔肝化纤颗粒对纤维化ACTA信号转导途径的影响.pdfVIP

中文摘要 目 的：本实验致力于研究柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠肝组织激活 素A(ACTA)表达、血清卵泡抑素(FS)及肝细胞凋亡的影响，从而探讨 柔肝化纤颗粒抗肝纤维化的作用及其机制，完善该药对TGF-卢超家族其 它成员的影响，进一步AK．TGF—D超家族信号转导水平上阐明中药治疗肝 纤维化的作用机制及名老中医治疗肝病的学术理论，找出作用靶点的规 律并整理提高，丰富中医药对肝纤维化的防治方法和方药。 方 2 0— 法：本实验选用健康清洁级大鼠10只，雌雄各半，体重22 2509，随机取16只作为正常对照组(A组)。剩余大鼠进行肝纤维化造模， 于第4周末造模大鼠随机处死8只，证实肝纤维化形成后，将其余造模大 鼠随机分为病理模型组(B组)、柔肝化纤颗粒大、中、小剂量组(C组， 组16只。采用四氯化碳(C01。)复合法大鼠肝纤维化模型，A、B组4周后 灌胃与治疗组同容积的生理盐水；C、D、E、F、G组造模4周后分别给予 柔肝化纤颗粒大(209／kg)、中(1 00 丸(0．29／kg)、秋水仙碱(1pg／kg)灌胃，以上各组分别于用药治疗 后6周、12周处死，剖取肝脏，腿染色后用光镜观察大鼠肝组织病理变 化和免疫组化法检测激活素A(ACTh)表达、血清卵泡抑素(FS)、肝细胞 凋亡的情况。 仕 甲 当口7R： (1)一般情况： 病理模型组大鼠随造模时间的延长，逐渐出现皮毛稀松、色黄、无 光泽，进食及饮水量减少，‘体重减轻，部分大鼠大便溏泻。正常对照组 在整个实验期间，皮毛紧密、色白、有光泽，饮食情况好，活泼好动，体 重增加。各治疗组开始治疗后，摄食、体重增加，毛色逐渐光润，活动趋 于正常。病理模型组动物较另外6组动物瘦弱，皮毛无光泽，倦怠，精 神萎靡，进食明显减少，激惹后烦躁易怒。 (2)肝组织腿及Masson胶原纤维染色光镜下观察： 模型组多数正常小叶结构被破坏或消失，由汇管区和中央静脉伸出 粗大胶原纤维条索分割、包绕肝小叶，肝细胞索排列紊乱，肝细胞水肿 明显，脂肪变性广泛，部分有坏死。纤维隔内有大量单核细胞、淋巴细 胞、嗜酸性粒细胞及成纤维细胞等细胞浸润。与模型组比较，各药物治 疗组肝小叶结构破坏明显减轻，肝脏胶原纤维增生亦明显减轻，纤维条 索疏松变窄。肝细胞水肿好转，变性情况明显改善，炎细胞漫润减少。 其中以柔肝化纤颗粒高、中剂量组肝脏结构改善较为明显。 (3)免疫组化结果： h，模型组ACTh阳性表达主要位于 正常组肝组织中几乎不表达ACT 中央小叶和门静脉周围肝细胞中，并在Kuffer细胞、类间质细胞质及其 周围也可见其表达，柔肝化纤颗粒治疗组阳性染色程度均较模型组明显 减轻(P0．01)。 (4)RT-PCR 正常肝组织几乎不表达ACTAmRNA，而模型组表达明显增强，ACT 中、低各治疗组ACTA／GAPDH比值明显降低(P0．01) (5)血清FS的表达变化： 柔肝化纤颗粒大、中剂量组升高血清FS水平的表达均优于秋水仙碱 组和大黄蟪虫丸治疗组(P0．05)；柔肝化纤颗粒小剂量组与秋水仙碱组、 大黄蠊虫丸组比较差异无明显意义(P0．05)。 ： (6)柔肝化纤颗粒对肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响 正常组大鼠肝组织中偶见凋亡细胞，模型组大鼠肝小叶内有较多凋 亡肝细胞，胞核呈棕黄色。模型组大鼠肝细胞凋亡较正常组明显升高 (P0．01)；柔肝化纤颗粒大、中、小剂量治疗组肝细胞凋亡均较模型组 有明显的降低(伙0．01)，其中柔肝化纤颗粒高剂量组肝细胞凋亡较低剂 量组显著降低(P0．05)。 结 论： (1)柔肝化纤颗粒能够改善肝纤维化大鼠的精神状态，皮毛色泽，饮 食情况，体重等一般情况。 (2)柔肝化纤颗粒能够明显减轻大鼠肝纤维化的程度，有比较强的抗 肝纤维化作用。 (3)柔肝化纤颗粒可以降低ACTh的表达和升高血清FS的水平、从 而减少肝细胞的凋亡，促进肝细胞再生。 关键词：柔肝化纤颗粒；肝纤